GFP成像研究植物细胞区室化的方法与应用.docVIP

GFP成像研究植物细胞区室化的方法与应用 摘要 水母gfp(绿色荧光蛋白)基因的克隆,以及它在转基因植物细胞内亚细胞定位表达的改进,已经给细胞内组织学和动力学分析带来新的观念. GFP与已知或非已知的完整蛋白的融合体显示出这些蛋白的定位,以及它们是否从一个区室转移到另一个中去. 研究者审慎地将GFP与其具有不同光谱性质的变异体定于不同的区室中,分析它们在发育过程中或是响应环境变化时大小、形状、流动性及动态的变化. GFP变异体间的荧光共振能量转移(FRET)能够辨别蛋白与蛋白之间是否结合. GFP还被用作传感蛋白,去检测钙离子、pH、电压、金属离子及酶活性的变化或区分.GFP的光漂白、光激活,与荧光相关光谱学的结合能测量GFP在区室内或区室间的扩散和运动的快慢. 这份评论涵盖了过去这些方法的应用,以及GFP成像在理解植物细胞的功能结构上的潜力发展. 关键词 绿色荧光蛋白 显微(镜检)术 细胞器 定位 光漂白 质体小管 共聚焦显微术 介绍 绿色荧光蛋白基因在细胞内表达的技术诞生,使十年前不敢想象的很多实验变成了现实. 在很多应用中,人们可以有了新的探究途径去了解细胞活动的组织结构. 这份评论将着重于GFP表达和成像方法,它们在理解植物细胞内的区室化上已经并将继续提供前沿动力,而那些关于如何使用特别的荧光,共聚焦激光扫描及多光子显微术去观察GFP衍生的荧光蛋白,则不在此累赘了. 不过可