儿童乙型肝炎病毒相关性肾炎中乙型肝炎病毒S基因变异和足细胞损伤的研究.ppt

儿童乙型肝炎病毒相关性肾炎中乙型肝炎病毒S基因变异和足细胞损伤的研究 周建华 朱慧 张瑜 吴衡生 方峰 HBV DNA S基因突变分析 ----与adw型中国流行株AY167097.1比较 30例乙型肝炎病毒相关性肾炎中, 21例（70%）有点突变，共计17种变异 16例（16/21, 76.2%）点突变导致S抗原中氨基酸取代 突变大多（11，68.8%）涉及丝氨酸、苏氨 酸和酪氨酸等MAPK和PTK的磷酸化位点 6例对照中3例有点突变，均为同义突变 图A, B. 肾小球足细胞WT1抗原染色结果，图C, D. 根据Weibel-Gomez方法，将图A, B进行图像处理的结果 HBV-MN患儿单位肾小球足细胞绝对数目及相对密度均较对照组显著下降，但单个肾小球毛细血管簇平均体积与对照组相比无明显改变 足细胞绝对数目的减少与肾小球中HBsAg的沉积强度相关， HBsAg免疫荧光强度≥++患儿的平均Npodo明显低于荧光强度++ 者 足细胞相对密度减少与蛋白尿程度相关，24 h尿蛋白定量小于2 g患儿的Nv明显高于大于2 g者 单位肾小球足细胞数量Npodo与血清补体C3水平正相关，足细胞相对密度Nv与C3水平无显著相关性（图B） 血清白蛋白水平与单位肾小球足细胞数量Npodo及足细胞相对密度Nv均无显著相关性（图C） 正常肾组织，Caspase-3仅见于少数肾小管上皮细胞胞浆，未见肾小球内表达 HBV-MN患儿肾组织，均存在Caspase-3的肾小球内表达，并且大多见于足细胞胞核区；在肾小管-间质区Caspase-3不仅见于肾小管上皮细胞胞浆，尚可见于胞核区，且表达的细胞数明显多于正常对照组 HBV-MN患儿肾组织活性Caspase-3的表达与肾脏病变病理分期显著相关，Ⅲ-Ⅳ期患儿的平均单个肾小球内阳性细胞比例及平均单位面积内肾小管-间质区阳性细胞个数均明显高于Ⅰ-Ⅱ期 但与HBsAg的沉积强度无显著相关性 HBV-MN患儿肾小球内活性Caspase-3的表达 与临床蛋白尿水平相关，24h尿蛋白定量大于50mg/kg患儿的平均单个肾小球内阳性细胞比例明显高于小于50mg/kg者 与血清补体C3 （SC3）水平、血清白蛋白（SAlb）水平等均无显著相关性 HBV-MN患儿平均单位面积内肾小管-间质区活性Caspase-3阳性细胞数 与蛋白尿水平显著相关，24h尿蛋白定量大于50mg/kg患儿的阳性细胞数明显高于小于50mg/kg者 与血清白蛋白水平相关，SAlb下降组的阳性细胞数明显高于SAlb正常组 与尿RBP水平显著相关，尿RBP升高组的阳性细胞数显著高于尿RBP正常组 结 论 1.乙型肝炎病毒相关性肾炎患儿大多存在HBV S基因变异 2.变异导致S抗原中氨基酸取代，其中大多（68.8%）涉及丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸等MAPK和PTK的磷酸化位点 3.这些重要位点的氨基酸取代有可能在乙型肝炎病毒相关性肾炎的发病中起作用。 4.HBV-MN患儿均存在不同程度的足细胞损伤、缺失，足细胞数量减少可能在HBV-MN的发病中起重要作用 5.HBV-MN患儿肾小球及肾小管-间质区均存在依赖Caspase-3的肾脏固有细胞凋亡 6.Caspase-3表达与肾脏病变严重程度、临床蛋白尿水平、血清Alb水平及肾小管功能蛋白水平相关 HBV S基因变异和足细胞损伤可能在HBV-MN 的病理过程中发挥重要作用 * - 全国儿科继发性肾脏病专题研讨议 - 华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科 同济医院儿科肾病研究室 我院1991~2003年间 肾活检 HBV-GN 69例 其中 膜性肾病65例 膜增生性肾炎2例 系膜增生性肾炎2例 HBV 宿主 HBV-GN 免疫应答差异 肾脏结合HBV差异 血清型基因型不同 准种不同 HBV变异 HBV S基因突变 HBsAg抗原性的改变，与肾脏组织亲和性改变 HBV-GN发病 研究对象 7．0 4～10 5 肾病乙肝病毒携带 7．2 4～12 30 乙型肝炎病毒相关性肾炎 平均年龄 (y) 年龄范围 (y) 总例数（n） 疾病类型 研究方法 提取患儿血清中HBV DNA PCR 序列分析 fasta软件分析 血清型、基因型、HBsAg序列差异 PCR 结果 1－8均为乙型肝炎病毒相关性肾炎患儿血清, Marker为DNA Ladder HBV血清型 所有患儿均为adw型, 未发现adr, ayr, ayw型。 AA122(AAG赖氨酸） AA160(AAA赖氨酸） adw型