实时定量PCRPPT课件.ppt

实时荧光定量PCR技术简介;BIO-RAD实时荧光定量PCR仪之 OUTLINE;实时荧光定量PCR原理;Opticon;如何对起始模板定量？ 通过Ct值和标准曲线实现对起始模板的定量分析 引入两个概念： 荧光阈值、Ct值 ;荧光阈值 在荧光扩增曲线指数增长期设定一个荧光强度标准(即PCR扩增产物量的标准);实时荧光定量PCR原理 定量原理;定量原理; 定量原理：利用已知起始拷贝数的标准样品作出标准曲线,通过未知样品的Ct值,从标准曲线上计算出该样品的起始浓度。 ;Determine C(t) value for unknown Interpolate quantity of unknown using the standard curve;实时荧光定量PCR原理;实时荧光定量PCR原理;实时荧光定量PCR原理;实时荧光定量PCR原理;实时荧光定量PCR原理 常规PCR;与传统PCR的比较;SYBR Green 1;SYBR Green I;SYBR Green I 工作原理;Bound SYBR Green I;SYBR Green I 工作原理;SYBR Green I 特点;Graph fluorescence intensity vs. temperature Decreasing fluorescence recorded Due to increasing temperature Due to denaturation and release of SGI Tm is the point of inflection on the melting curve;Plot the negative of the rate of change of fluorescence vs. temperature (-dI/dT);BIO-RAD实时荧光定量PCR仪之 SYBR Green I 融解曲线分析;For reliable nucleic acid quantification, each primer set requires individual optimization Parameters used to optimize reaction specificity and efficiency Primer design Amplicon design Concentration of reagents Cycling conditions Denaturation and annealing temperatures;SYBR Green I 应用范围;Molecular  Beacons;Molecular Beacons;变性: 产生非特异性的荧光;Target-loop interaction more stable than stem-stem;延伸: 没有荧光;Molecular Beacons 应用范围;Molecular Beacons SNP;Molecular Beacons 优点;Molecular Beacons 缺点;TaqMan;TaqMan;R;TaqMan 实验结果;TaqMan 应用范围;TaqMan 优点;TaqMan 缺点;兼容化学试剂总结;MJR系列实时荧光定量PCR仪之;MJR系列实时荧光定量PCR仪之 内标法;MJR系列实时荧光定量PCR仪之 内标法;实时荧光定量PCR技术之 多色双通道技术;一个PCR管内进行两种PCR扩增要解决的问题： 1、引物及探针问题---引物及探针的相 互干扰 2、模板量差别---共用资源的相互竞争;F;F;F;实时荧光定量PCR技术之 多色双通道技术;实时荧光定量PCR原理 OUTLINE;F;Q;从病人血液样品中提取 DNA 基因型分类： A/A (Allele 1) G/G (Allele 2) G/A (Heterozygote);Allele 1 control;Allele 2 control;Heterozygote control;实时荧光定量PCR技术之 多色双通道技术应用-基因型分析;实时荧光定量PCR技术之 多色双通道技术应用-基因型分析;MJR系列实时荧光定量PCR仪之 OUTLINE;MJR系列实时荧光定量PCR仪之 OUTLINE;实时荧光定量PCR技术之 应用;临床定量研究的应用： 病原微生物引起的疾病的检测 病原微生物含量与病情的