第11章 生物素亲合素放大技术（2011年 姚课件.ppt

返回 +A +A 亲和素-标记生物素法（BAB法）：先使抗原与生物素（B）化的抗体结合，再以游离亲合素(A)将生物素化的抗体与酶标生物素搭桥连接，也达到多层放大效果 亲合素(A) 生物素化的抗体 酶标生物素 底物 选择题 BAB法中的“桥”是指（ ） A. 第一抗体 B.第二抗体 C.抗原 D.生物素 E.亲和素 E BA法（标记亲和素-生物素法） 特点：以标记亲和素/标记链霉亲和素（A-E/SA-E）代替BAB法中的游离亲和素（A），省却了加标记生物素（B-E）的步骤 BAB法（亲和素-标记生物素法）： 特点：以游离亲和素为桥臂，分别连接生物素化抗原（或抗体）和标记生物素（如酶标生物素） +A-E BA法（标记亲和素-生物素法）：以标记亲和素/标记链霉亲和素（A-E/SA-E）代替BAB法中的亲和素（A），省却了加标记生物素（B-E）的步骤 A-E + B-E + A ABC ABC法 　特点:将BAB法中的A（亲和素）先与B-E（酶标生物素）结合，制备成复合物ABC（亲和素-生物素-过氧化酶复合物） ABC法 原理示意图 特点：将BAB法中的A（亲和素）先与B-E（酶标生物素）结合，制备成复合物ABC 第十一章 生物素－亲和素免疫放大技术 姚 军 台州学院医学院医学检验系 Dr. Yao Jun, Faculty of Laboratory Medicine in Taizhou College 概述： 70年代后期在免疫酶技术中利用生物素-亲和素系统(Biotin-Avidin System BAS)标记抗体发展了又一种新型生物反应放大技术 维生素H 动、植物组织中广泛 分布,卵黄和肝含量高 MW 244.31kD I 咪唑酮环 Ⅱ 噻吩环 羧基 第一节 生物素理化性质与标记 生物素（Biotin)有两个环状结构 I环（咪唑酮环）为与亲和素结合的主要部位 II环（噻吩环）为结合抗体和其它生物大分子的部位，C2上戊酸侧链的未端羧基是结合生物大分子的唯一结构 选择题 生物素分子中与亲和素结合的重要部位是（ ） A.咪唑酮环 B.苯环 C.吩噻环 D.羰基 E.-NH- A 一、活化生物素 生物素侧链的末 端羧基经化学修 饰后制成带各种 活性基团的衍生 物－活化生物素 (生物素化衍生物) II环为噻吩环，其末端羧基是结合抗体和其他 生物大分子的惟一结构，经化学修饰后成 为活化生物素 用活性生物素标记的物质，下列哪项除外（ ） A.蛋白质的氨基 B.蛋白质的羧基 C.蛋白质的巯基 D.蛋白质的醛基 E.核酸 选择题 B 活化生物素 标记蛋白质氨基的活化生物素 BNHS分子可与蛋白质 赖氨酸的氨基形成肽键 BNHS适用标记抗体和 中性或偏碱性的蛋白质 生物素 N-羟基丁二酰胺 碳二亚胺 生物素N- 羟基丁二 酰亚胺酯 （BNHS ） 如何减小空间位阻？ 长臂活化生物素（BCNHS）： 生物素和N-羟基丁二酰亚胺之间添 加了两个6-氨基已糖分子基团，形 成连结臂，以减少位阻效应的影响 长臂活化生物素 (BCNHS) 是在生物素和 N-羟基丁二酰亚胺之间添加了两个 6- 氨基己糖分子基团，形成连结臂， 使其与抗体、酶等生物大分子结合后，不受位阻效应的影响, 更易发挥生物素的活性作用 4.常用于标记抗体的活化生物素是（ ） A.BNHS B.BHZ C.BCNHS D.BCHZ E.MPB 选择题 A 标记蛋白质醛基的活化生物素 生物素酰肼(BHZ)：水合肼与生物素的合成物 主要用于标记偏酸性糖蛋白(Ag) 肼化生物胞素(BCHZ) ：生物素与赖氨酸连接 后，再与无水肼反应而成。除醛基外， BCHZ还可标记氨基 .常用于偏酸性抗原标记的生物素是（ ） A.BNHS B.BHZ C.BCNHS D.BCHZ E.MPB 选择题 B 标记蛋白质巯基的活化生物素 马来酰亚胺-丙酰-生物胞素（MPB) 能特异地与蛋白质巯基结合的活化 生物素 标记核酸的活化生物素 光生物素(photobiotin) 侧链上连接的芳香基叠氮物基团, 经光照后, 变为芳香基硝基苯，可直接与腺嘌呤氨基结合, 形成B（生物素）-核酸探针 生物素脱氧核苷三磷酸（Bio-dUTP） 作为TTP（三磷酸胸苷）的结构类似物，可 采用缺口移位法掺入到双链DNA中 BNHS和BHZ 可直接标记核酸， 但对碱基配对有影 响（影响氢键的形成） 活化生物素通过侧链与蛋白分子连接 一个蛋白分子可被多