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本科毕业论文(设计)外文翻译 学 院 专 业 药学 姓 名 学 号 指导老师 职 称 合作老师 职 称 外文题目（原文） Silver staining DNA in polyacrylamide gels 译文： 聚丙烯酰胺凝胶上DNASilver staining DNA in polyacrylamide gels Brant J Bassam1 Peter M Gresshoff2 本文描述了一种简单但更优越的银染法，应用于聚丙烯酰胺凝胶 介绍 用聚丙烯酰胺凝胶 作为一种染色方法，最初发展银染法的目的是为了检测PAGE分离后的蛋白质。之后，该方法被进一步优化，并应用于其他生物分子的检测，如核酸，脂多糖类，糖蛋白类和多糖类。但是这些早期方法的操作相对繁琐，且灵敏度有限。 Caetano-Anolle′s et al对于DNA指纹谱图放大技术（DAF）的发展要求一种更好的方法来充分地辨析和显像复杂的DNA图谱。这些要求直接导致聚酯—聚丙烯酰胺凝胶Bassam et al.单独地描述了为DAF而发展的银染法，该方法已经被广泛地接受，包括在商业领域（如GenePrint STR系统，美国的Promega公司的银后续产品）。 DNA（其他生物样品）银染法有如下优点： 第一，在正常环境光度下可进行图像的形成和显像。因此，该过程可以在实验室的工作台上进行操作，不用暗室或紫外照明设备。 第二，由凝胶板上银离子和生物分子直接结合所致的高灵敏度和高清晰度可使图像进行更容易的辨析。因此图形的显像主要是从该基色原而来，不会褪色和移位，这就能够用其他方法对凝胶进行二次处理，如荧光染色，放射自显影 第三，银染法的灵敏度与放射自显影法 第四，作为一种更好的选择，凝胶可放在半硬塑料薄膜衬垫上进行干燥，如GelBond PAG薄膜，这样可对最初的材料进行永久的记录（ref.10是一种修改后的方法）。空气干燥的凝胶具有弹性，能保存高染色度和高对比度的图像。这样的凝胶可长期保存不变形，进行图像处理和打印时无需添加额外费用。此外，保存的凝胶就如“分子档案”，因为染色的DNA条带是可以被提取出来，放大，克隆以及能进行后续操作的真正的DNA。 虽然本文所描述的方法是关于PAGE的DNA显像， 但是该方法也可以不做修改地用于其它生物分子的显像，如RNA，多糖类，脂多糖类 1. 材料 1.1 试剂 冰醋酸，AR (ACS).关键：要获得高质量的结果，须用高纯度的试剂。 硝酸银晶体，AR（ACS）.关键：要获得高质量的结果，须用高纯度的试剂。 甲醛溶液 硫代硫酸钠 碳酸钠粉末，≥99.5%，ACS试剂.关键：要获得高质量的结果，须用高纯度的试剂。 乙醇 聚丙烯酰胺凝胶 显影液 显影终止剂 1.2设备 带龙头的塑料盛酸容器（普通实验室供给） 普通实验室手套，关键：无粉手套 摇床或轨迹震荡仪（普通实验室供给） 盛放银溶液容器（向沉淀的银中加入NaCl）（普通实验室供给） 垃圾清理工具，普通实验室供给 可选：为了把最初的凝胶完好地保存，我们用聚酯—聚丙烯酰胺凝胶Bassam and Bentley描述的一种最新的方法。 循环水泵 第二代微型蛋白初产物仪 索尼DSC R1数码相机 1.3 试剂的制备 1.3.1 定影液：用去离子水将冰醋酸稀释至7.5%，室温保存(18－25 1C)。一个容积适合的带龙头塑料容器。定影液较稳定，可大量配制。注意：溶液有轻微的腐蚀性（家用食醋的浓度为5%），禁止吸入其蒸气。 1.3.2 甲醛溶液:向85ml的去离子水中加入15ml的甲醛。注意:该溶液的组成成分有毒性，应小心操作。参考当地职业健康与安全法规。关键：该溶液必须现配，确保甲醛在室温下保存，因为冷藏（如4℃）会失活。关键：在准备之前，须估量容器是否足够盛放要染色的凝胶的数量和大小。 1.3.3 银溶液：将0.1g的硝酸银溶入100ml的去离子水中。注意:该溶液的组成成分有毒性，应小心操作。参考当地职业健康与安全法规。关键：该溶液必须现配。关键：在准备之前，估计盛放准备染色的凝胶的容器的容积大小是否合适。 1.3.4 硫代硫酸钠存贮溶液：将0.2g的硫代硫酸钠溶入50ml的水中配制而成。关键：该溶液必须每周重配，所以每次尽量少量配制以免浪费。关键：在准备之前，须估量容器是否足够盛放要染色的凝胶的数量和大小。 1.3.5 显影液：将3g Na2CO3溶入100ml的去离子水中配制而成。为了加快溶解速度，避免凝集沉积，配置时缓缓加入Na2CO3并快速搅拌。关键：该溶液要用时须现配，并在～8℃条件下使用。因此，在使用前，监控好温度并将溶液倒入并外壁盛有冰块的烧杯里搅拌会使得使用更加方便。如果温度太低，将烧瓶放在热水龙头下冲洗回温。关