重组大肠杆菌 E.coli P84A MC1061发酵生产卤醇脱卤酶研究.docVIP

重组大肠杆菌 E.coli P84A MC1061发酵生产卤醇脱卤酶研究 　　摘 要：用基因工程大肠杆菌 E.coli P84A/ MC1061生产卤醇脱卤酶，此后，进一步进行了酵母浸出物FM888与酵母蛋白胨FP101的联合调控作用研究。结果表明，用高溶解度酵母浸出物FM888替代原配方中的牛骨蛋白胨，可使E. coli P84A/ MC1061生长速率增大，发酵稳定期的菌体浓度保持在较高水平，酶活提高了约2.4倍。当补料培养基中的FM888与酵母蛋白胨FP101的比例为7∶3时，菌体浓度保持在较高水平（OD600≥120），酶活进一步提高约50%，大大提高了单罐产率。此研究可为其他酶制剂的发酵生产提供借鉴。 　　关键词：卤醇脱卤酶；发酵控制；酵母浸出物；酵母蛋白胨 　　中图分类号：Q939.9 文献标识码：A DOI编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2013.07.002 　　Study on the Halohydrin Dehalogenases Produced by Recombinant E.coli P84A/ MC1061 　　PAN Dong-rui1， LI Xiao1，2， ZHANG Yao1， LI Jian-hua2， TAN Ya-li1 　　（ 1. College of Chemistry and Biology， China Three Gorges University， Yichang， Hubei 443003，China； 2. Angel Yeast Company Limited， Yichang， Hubei 443003， China） 　　Abstract： In this research， the recombinant E. coli P84A / MC1061 was utilized to produce halohydrin dehalogenases. With the ox bone peptone in the original formula replaced by the high solubility yeast extract yeast extract FM888， the growth rate of E. coli P84A/ MC1061 increased largely， and its dry cell weight maintained at a higher level in the stationary phase， what’s more， the enzyme activity increased by 2.4 times. Then， integrating FM888 and yeast peptone FP101 into the regulation of the fed batch fermentation， the biomass maintained at a higher level （OD600≥120） and enzyme activity increased by about 50% when the proportion of FM888 and FP101 was 7∶3. This research could be used for reference by other industrial enzymatic production. 　　Key words： halohydrin dehalogenases； fermentation control； yeast extract； yeast peptone 　　E. coli P84A /MC1061中含有卤醇脱卤酶外源基因的质粒，在添加L-阿拉伯糖诱导[1]后，可随菌体生长而在胞内表达卤醇脱卤酶。卤醇脱卤酶也叫卤醇-卤化氢裂解酶[2]，在催化环氧化物和邻卤醇之间的转化反应中，卤醇脱卤酶具有很高的立体选择性，因而在手性药物合成方面也有广阔的应用前景???序列同源性搜索以及二级、三级结构预测表明，卤醇脱卤酶的结构相似于短链脱氢酶/还原酶家族（SDRs），它的3个重要的催化残基分别是：Tyr 145、Ser132和Arg149 [3] 。卤醇脱卤酶是目前世界范围内的一个全新的研究领域，目前的研究均仅限于卤醇脱卤酶基因的改造和优化[4]，对于大肠杆菌发酵生产卤醇脱卤酶的影响因素及过程调控的研究甚少，且国内外培养重组大肠杆菌生产卤醇脱卤酶的研究中，至今未报道培养基氮源的优化。而利用大肠杆菌生产其他蛋白的培养基氮源使用也都仅限于动物蛋白胨（酪蛋白胨、胰蛋白胨等）[5]和植物蛋白胨（大豆蛋白胨等）[6]。