刺五加中刺五加总苷大孔树脂工艺精制研究.docVIP

刺五加中刺五加总苷大孔树脂工艺精制研究 　　摘 要：目的：筛选刺五加总苷的大孔树脂纯化工艺。方法：以紫丁香苷为对照，采用分光光度法，通过刺五加总苷对5种大孔树脂的静态吸附及解析效果考察，筛选出适合纯化刺五加总苷的大孔树脂，进而通过动态吸附及解析的条件对纯化刺五加总苷的工艺进行优化。结果：D-101型大孔树脂适合纯化刺五加总苷，优化后的最佳富集工艺条件为：上样液质量浓度为0.3 g·ml-1，上样量为50 ml/10 g树脂，依次用7倍树脂体积量水及75%乙醇进行洗脱，浓缩干燥乙醇洗脱液，得刺五加总苷。刺五加总苷转移率达60%以上。结论：本方法适合刺五加总苷的富集。 　　关键词：刺五加 刺五加总苷 大孔吸附树脂 工艺优化 　　中图分类号：R284 文献标识码：A 文章编号：1672-3791（2013）03（b）-0226-02 　　刺五加为五加科植物刺五加Acnthopanax senticosus （Rupr.et Maxim.） Harms的干燥根及根茎，又名五加参、刺拐棒，具有扶正固本、补肾安宁之功效[1]。刺五加中含紫丁香苷，刺五加苷D和异秦皮啶等酚苷类物质。药理学实验表明，刺五加具有抗心肌缺血[2]，抗疲劳[3]，改善老年痴呆及帕金森氏症[4～6]等作用，其主要有效组分为刺五加总苷。本实验以刺五加总苷为考察指标，采用大孔吸附树脂法对其进行富集，确定刺五加总苷的最佳富集条件。 　　目前有关于应用大孔吸附树脂富集刺五加总苷的报道中，终产品有效物质含量都不足20%[7]，本研究希望对此有所改进。 　　1 仪器与试药 　　W-2102 PC型紫外可见分光光度计（上海尤尼柯仪器有限公司）；LC-20AT高效液相色谱仪（日本岛津公司）；KQ-250B型超声波震荡提取器（昆山市仪器有限公司）。 　　刺五加生药购自当地某药店（产地：吉林，批号：D0201），由北京药植所赵晓宏副研究员鉴定为五加科植物刺五加Acnthopanax senticosus （Rupr.et Maxim.） Harms的干燥根及根茎；紫丁香苷（纯度≥98%，成都曼思特生物科技有限公司，批号：MUST，甲醇、乙醇（分析醇），RO反渗透水，D-101型，D-201型，AB-8型，ADS-7型，S-8型大孔树脂购自沧州宝恩吸附材料科技有限公司。 　　2 方法与结果 　　2.1 刺五加总苷含量测定方法[8] 　　2.1.1 测定波长???选择 　　配制一定浓度的紫丁香苷对照品溶液，在190 nm～1100 nm进行全波长扫描，在265 nm处有最大吸收，因此确定265 nm为测定波长。 　　2.1.2 标准品溶液的配制 　　精密称取紫丁香苷标准品2.51 mg，用甲醇定容于50 ml容量瓶中，配制成浓度为50.2 μg·ml-1的对照品溶液，摇匀，过0.45 μm微孔滤膜，备用。 　　2.1.3 上柱样品液的配制 　　取刺五加生药材粗粉2 kg，加入10倍量浓度为60%的乙醇溶液，80 ℃热回流提取2次，每次1 h，合并提取液，过滤，浓缩至干，制成干膏。上样时加入不同体积的溶剂配制成浓度适宜的上柱样品液。 　　2.1.4 标准曲线的制备 　　分别精密吸取对照品溶液1 ml，1.5 ml， 2 ml，2.5 ml，3 ml，3.5 ml于10 ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得系列对照品溶液。以甲醇为空白，在265 nm处测定吸光度，以紫丁香苷浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，做标准曲线，得回归方程为Y=0.047X-0.003，r2=0.9999，结果表明紫丁香苷在5～17 μg·ml-1范围线性良好。 　　2.1.5 样品测定 　　精密秤取刺五加干膏0.13 g，用甲醇定容于25 ml容量瓶中，过滤，取滤液，以甲醇为空白，在265 nm处测定吸光度，带入回归方程，经计算提取物中刺五加总苷含量为13.0%。 　　2.2 不同型号大孔吸附树脂的筛选[9] 　　2.2.1 静态吸附性能考察 　　精密取5份刺五加干膏0.340 g，分别置250 ml具塞锥形瓶中，加入50 ml水使之充分溶解，顺次加入2.000 g已处理好的5种不同树脂，20 °C恒温振摇24 h，转速130 r·min-1，使之饱和吸附，将滤液浓缩至干，在265 nm处测定吸光度，按以下公式计算不同型号的大孔吸附树脂对于刺五加总苷的吸附率：吸附率%=（吸附前上柱样品液中刺五加总苷量-吸附后滤液中刺五加总苷量）/吸附前上柱样品液中刺五加总苷量×100%，平行做3次，平均吸附率分别为：D-101：91.17%； D-201：85.21%；AB-8：94.80%；ADS-7：93.98%；S-8：94.80%。 　　2.2.2 静态解析性能考察