答辩A型肉毒毒素对瘢痕的抑制效应课件.pptVIP

A型肉毒毒素对兔耳瘢痕挛缩的抑制效应 重庆医科大学附属第一医院烧伤整形科 硕士研究生 彭旦生 导 师 张恒术教授 论文内容 第一部分 动态观测兔耳创面愈合、收缩与瘢痕增生、消退过程中的组织学变化 第二部分 A型肉毒毒素对兔耳瘢痕挛缩的抑制效应 立题依据 瘢痕收缩机制 立题依据  近年一些研究表明A型肉毒毒素可以影响瘢痕中成纤维细胞增殖分化为肌成纤维细胞，促进细胞凋亡，减少胶原合成等作用。 立题依据 A型肉毒毒素经典作用机制：阻滞突触前膜乙酰胆碱释放 目 的 探讨创面（或瘢痕）收缩的机理。 研究BTXA对瘢痕挛缩的抑制效应，为瘢痕挛缩的防治提供具有实用价值的理论依据和有效方法。 主要仪器及试剂 光学显微镜 透射电子显微镜 一抗：鼠抗兔Actin抗体 二抗：HRP标记的羊抗鼠Ig-G 方 法 分 组 方 法 兔耳腹侧 2cm×2cm创面 每个创面以兔耳长轴为对称线 创面间隔1cm以上 去掉兔耳全层皮肤及软骨膜 每只兔耳作2个创面 方法 实验观察及检测内容 进行形态学观察、记录瘢痕愈合时间、测量瘢痕面积、测定瘢痕增生指数。 分别在术后16、30、40、60d 进行HE染色、VG染色、免疫组化染色，检测不同时期瘢痕组织中胶原蛋白、成纤维细胞、肌成纤维细胞的表达及变化情况。 电镜观察术后60天各组α-SMA蛋白的表达。 实验步骤 光学显微镜标本制作 流程图 实验步骤 HE染色 VG染色 免疫组化 电镜标本制作及观察 结 果 生理盐水组 愈合过程中上皮化时即能触到硬块，淡红色，明显高出周围皮肤 瘢痕收缩明显。 结 果 BTXA组 瘢痕稍高出周围正常皮肤，但较生理盐水组平整、质地柔软。 瘢痕可见收缩 结 果 醋酸曲安奈德组 瘢痕平坦，质地柔软、色泽变淡 瘢痕收缩小 结 果 BTXA组 vs 生理盐水P﹥0.05 曲安奈德 vs 生理盐水P 0.05 结果 兔耳创面（或瘢痕）面积 方法：玻璃纸贴于兔耳创面表面，临摹创面大小，经数码相机成像后，运用 IPP6.0图像分析软件计算创面面积。 结 果 生理盐水组 大量成纤维细胞 漩涡状结构或胶原小结 结 果 BTXA组 成纤维细胞数量减少 漩涡状结构减少 结 果 曲安奈德组 成纤维细胞数量最少 未发现漩涡状结构 结 果 生理盐水组 瘢痕增生指数约4.0 胶原致密、粗大，排列紊乱。 注：瘢痕增生指数（HI）=瘢痕高度（SH）/正常皮肤高度（DH） 结 果 BTXA组 瘢痕增生指数约2.5 胶原减少、排列相对整齐。 结 果 曲安奈德组 瘢痕增生指数约1.5 胶原稀疏、排列比较规则 胶原纤维束间有较大空隙 结 果 瘢痕增生指数变化 结 果 结 果 生理盐水组 可见大量肌成纤维细胞 胞浆内α-SMA蛋白（棕黄色颗粒者）表达丰富 结 果 BTXA组 肌成纤维细胞数量比生理盐水少 胞浆内α-SMA蛋白表达少 结 果 曲安奈德组 肌成纤维细胞数量较少 胞浆内α-SMA蛋白表达最少 结 果 方法：光学显微镜下数码相机对每个免疫组化标本随机照相，将所得照片剪切为相同大小， 运用IPP6.0图像分析软件计算每张图片的累计光密度值。 结 果 结 果 生理盐水组 少量肌成纤维细胞 胞体较大，粗面内质网丰富，高尔基体较发达 胞浆内α-SMA蛋白丰富 结 果 BTXA组 肌成纤维细胞稀少 胞内粗面内质网、高尔基体不发达 胞浆内α-SMA蛋白含量少 结 果 醋酸曲安奈德组 未发现肌成纤维细胞，可见成纤维细胞 未发现α-SMA蛋白 讨 论 BTXA对胶原合成的影响 增生性瘢痕的组织特征为成纤维细胞过度激活增殖伴随大量的胶原合成堆积，旋涡状结构或胶原结节是其典型特征。 本实验HE染色、VG染色、瘢痕增生指数结果表明BTXA可减少成纤维细胞和胶原纤维的数量，对瘢痕增生有一定抑制作用，其作用机制可能是通过抑制成纤维细胞增值或促进其凋亡、减少胶原合成而实现，但其抑制作用不及醋酸曲安奈德。 讨 论 一致的看法认为瘢痕收缩的动力源自肌成纤维细胞或成纤维细胞的作用 。 本实验结果表明BTXA可减少肌成纤维细胞数量及α-SMA蛋白的表达，减轻瘢痕挛缩。 BTXA对小面积的瘢痕增生及挛缩的防治有一定应用前景，比如手部瘢痕挛缩的防治。 结 论 BTXA可明显抑制兔耳增生性瘢痕的形成，同时可抑制增生性瘢痕的挛缩。 BTXA抑制兔耳瘢痕增生和挛缩的效应可能是通过抑制（肌）成纤维细胞增殖或促进其凋亡，减少