基于表面增强拉曼光谱超灵敏丙二醛(MDA)检测.docVIP

基于表面增强拉曼光谱超灵敏丙二醛(MDA)检测 　　实验室，湖南 长沙 410082；3.湖南大学化学化工学院，湖南 长沙 410082） 　　摘要：文章发展了一种基于SERS光谱技术的高灵敏的丙二醛检测方法。该方法利用TBA/MDA加合反应的生成物能够自组装到金纳米颗粒表面实现SERS信号传导的原理，实现了对丙二醛的高灵敏和高特异性的SERS检测，最终丙二醛的检测下线为12nM。该方法有望成为油脂和挂面中丙二醛含量的测定新方法。 　　关键词：SERS光谱技术；丙二醛；拉曼光谱 　　中图分类号：O647 文献标识码：A 文章编号：1009-2374（2013）24-0014-03 　　1 概述 　　丙二醛（Malondia Ldehyde，MDA）是油脂氧化变质生成的过氧化脂质，在热、光、重金属等过氧化物分解因子存在下，进一步分解产生的一种醛类物质。随着油脂氧化变质程度的发展，丙二醛含量较酸价及过氧化值有明显的增高。丙二醛具有灵敏的特性，稳定性好，是客观评价油脂酸败程度的敏感指标之一。同时，挂面生产中最常见的问题是夏天挂面容易蛤变，主要是挂面中含有大约2%的脂类物质。研究脂质氧化最普遍的方法是衡量脂质氧化的终产物（即丙二醛，MDA）的含量。目前，已经报道的MDA检测方法大多是利用了2-硫代巴比妥酸（TBA）与MDA的加合反应原理，其加合产物是一种Schiff base化合物，具有很好的光吸收（吸收波长535nm）以及荧光性能（激发波长515nm，发射波长553nm），且随产物量的增多，溶液颜色呈现由粉色至红色的颜色变化。由于这种方法步骤简单、反应快速，已被广泛用作诊断组织伤害和脂质氧化程度的指标。 　　传统的MDA检测方法主要是紫外可见吸收光谱或荧光光谱法，这些方法灵敏度较低，且易受本底荧光的干扰。后来，发展了高压液相色谱分析方法，使灵敏度得到显著提高，成为目前普遍应用的检测方法，但是这种方法需要借助于大量有机试剂、毒性大，并且需要经过复杂的样品预处理步骤，操作过程耗时、费力。另外，近几年，结合新型的检测技术，还发展了毛细管电泳分析方法和流动注射分析方法，然而，这些方法操作步骤复杂，难以掌握，且需要昂贵的仪器，分析成本较高。相对于其他的光谱技术，表面增强拉曼光谱（Surface enhance Raman scattering spectroscopy，SERS spectroscopy）具有灵敏度高、谱图信息丰富、发射谱带窄以及无需样品预处理等优势。近年来，SERS光谱技术成为一种越来越重要的分析工具，尤其对于能够有效地吸附到活性表面且具有理想的散射截面的分析物。本章中，我们发展了一种基于SERS光谱技术的高灵敏的MDA检测方法。该方法简单、快速、准确、成本低，并且相对于其他的基于荧光光谱技术的分析方法，SERS检测技术赋予了方法更高的灵敏度，且不易受本底荧光的干扰。所以，我们发展的基于SERS光谱技术的MDA检测方法为过氧化脂质的分析研究建立了一个新的 　　平台。 　　2 实验部分 　　2.1 仪器与试剂 　　本实验中用到的2-硫代巴比妥酸（2-thiobarbituric acid，TBA）和1，1，3，3-四甲氧基丙烷（1，1，3，3-tetramethoxypropane，TEP）购买于Sigma-Aldrich公司（圣路易斯，密苏里州，美国）。二甲基亚砜（DMSO）、柠檬酸三钠、氯金酸、甲醛溶液（36.5%～38%）、乙醛、正丙醛和戊二醛购买于上海生工生物工程有限公司（上海，中国）。所有其他的化学试剂都是分析纯，购买于国药集团化学试剂有限公司（北京，中国）。实验所用溶液均由超纯水配制，其电阻18.3MΩ/cm。 　　2.2 金纳米颗粒的制备 　　尺寸为30nm左右的金纳米颗粒（Au nanoparticles，AuNPs）根据文献报道的柠檬酸三钠还原法制备。步骤如下：200mL 0.01%氯金酸溶液加热至沸，剧烈搅拌的条件下，快速地加入3mL 1%的柠檬酸三钠溶液，几分钟内，溶液颜色由浅黄色变为酒红色，继续加热15min后，撤去热源，慢慢地冷却至室温，置于4℃保存。取60L金纳米颗粒溶液于微量比色皿，使用紫外可见分光光度计（Shimadzu，日本）对其进行光吸收波谱扫描，根据光吸收波长在530nm处的摩尔消光系数3.0×109M-1cm-1，计算出金纳米颗粒溶液的浓度为～0.3nM。 　　2.3 MDA的SERS检测 　　TBA溶液配制：由于TBA对空气敏感，每次实验前需新鲜制备。称取67mg TBA溶于1mL DMSO，再加入9mL灭菌水，得到浓度为0.67%的TBA溶液。工作样品配制：由于TEP在水溶液中可以很快地水解成MDA，每次实验前需要新鲜制备。取4.16L TEP溶液溶于