天达V901草菇菌丝生长条件筛选与优化.docVIP

天达V901草菇菌丝生长条件筛选与优化 　　摘 要：采用单因素试验和正交试验相结合的方法，研究了天达V901草菇菌丝在不同营养条件和不同培养条件下的生长状况。结果表明，适宜草菇菌丝生长的碳源有葡萄糖、纤维素、可溶性淀粉、麦芽糖和蔗糖，但对草菇菌丝生长最有利的碳源是可溶性淀粉；适宜草菇菌丝生长的最佳氮源是蛋白胨；最佳碳氮比是10∶ 1；最佳可溶性淀粉浓度是5.0%；钾对草菇菌丝生长有明显促进作用。草菇菌丝生长的最适温度为35℃；最适pH值为7.5。 　　关键词：草菇； 菌丝生长；生物学特性；生长条件优化 　　中图分类号：S646.1+3 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2012）10-0079-05 　　草菇[Volvariella volvacea（Bull.ex Fr.）Sing.]属担子菌纲、伞菌目、光柄菇科、苞脚菇属。最早栽培于我国，已有二百多年的历史。草菇是一种高温型草腐真菌。草腐菌栽培所用的主要原料为作物秸秆，以及禾本科植物的秸秆。草腐菌菌丝生长适宜的碳源为蔗糖、葡萄糖，以及经发酵腐熟的农作物秸秆、家畜禽粪和其他木腐菌利用后的菌渣；氮源为蛋白胨、酵母粉、麸皮、玉米粉和米糠等。人工栽培时，由于所需原料的碳氮比不同，因此，筛选和优化草菇的营养成分及其环境条件，是草菇优质高产的关键。本试验选用7种碳源和6种氮源在不同温度和酸碱度条件下进行试验，以获取适宜草菇菌丝生长碳氮比、碳源浓度及温度、pH值等条件。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验菌种 　　天达V901为山东省农业科学院农业资源与环境研究所微生物室保存菌种。 　　1.2 供试培养基 　　1.2.1 加富PDA培养基 马铃薯200 g，麸皮80 g，葡萄糖20 g，蛋白胨4 g，磷酸二氢钾3 g，硫酸镁1.5 g，维生素B1 2片（10 mg/片），琼脂15 g，水1 000 ml，pH自然。121℃灭菌20 min。 　　1.2.2 基础培养基 葡萄糖20 g，蛋白胨4 g，磷酸二氢钾3 g，硫酸镁1.5 g，维生素B1 2片（10 mg/片），琼脂15 g，水1 000 ml，pH自然。121 ℃灭菌2 0min。 　　1.3 试验方法 　　1.3.1 菌种活化 从试管斜面上挑取草菇菌块接种到加富PDA培养基平板上，30℃进行培养。待长满平板后，用打孔器将其打成直径5 mm的菌块，接种到供试培养基上进行试验。 　　1.3.2 菌丝长速及长势观察 在不同培养基和培养条件下，接种培养24 h后，用十字交叉法测量菌落直径，每隔24 h测量1次，连续测量3次，计算菌丝日均生长速度；同时观察、记录菌丝长势，主要是菌丝粗细、浓密程度、菌落完整性及色泽等。 　　1.3.3 营养成分对菌丝生长的影响 在基础培养基上依次对最适碳源、最适氮源、最适碳氮比及最适碳源浓度进行优化试验，测定矿物质元素对菌丝生长的影响，每次试验优化的结果进入随后的优化试验中。 　　（1）最适碳源：葡萄糖、果糖、麦芽糖、蔗糖、糊精、可溶性淀粉和纤维素分别代替基础培养基中的葡萄糖，添加量按所含碳源量相等为准。每一种碳源试验设6个平行试验，测定菌丝日均生长速度，观察记录菌丝长势。 　　（2）最适氮源：确定最适碳源后，再分别用含氮量相当于4 g蛋白胨的玉米浆、酵母粉、豆粕粉、尿素、硫酸铵、硝酸铵、硝酸钾代替基础培养基中的蛋白胨，每一种氮源试验设6个平行试验，测定菌丝日均生长速度，观察记录菌丝长势。 　　（3）最适碳氮比：用最适碳源、氮源代替基础培养基中的葡萄糖和蛋白胨，碳源的浓度固定在3%，改变氮源浓度，配成碳氮比为10∶ 1、20∶ 1、30∶ 1、40∶ 1、50∶ 1、60∶ 1、70∶ 1、80∶ 1、90∶ 1、100∶ 1的培养基，每一个试验设6个平行试验，测定菌丝日均生长速度，观察记录菌丝长势。 　　（4）最适碳源浓度：用最适碳源、氮源代替基础培养基中的葡萄糖和蛋白胨，碳氮比固定在最适碳氮比的条件下，分别改变碳源浓度，配成碳源浓度为0.5%、1.0%、2.0%、3.0%、4.0%、5.0%、6.0%的培养基。 　　（5）碳源浓度和碳氮比正交试验：对碳源浓度和碳氮比进行两因素三水平的正交试验，每一个试验设6个平行试验，测定菌丝日均生长速度，观察记录菌丝长势。 　　1.3.4 培养条件对菌丝生长的影响 在加富PDA培养基上对最适培养温度和最适pH值进行试验，每次试验优化的结果进入随后的优化试验中。 　　（1）最适培养温度：将菌种接种到加富PDA培养基上，置于20、25、30、35、40℃条件下进行培养，每一个试验设6个平行试验，测定菌丝日均生长速度，观察记录菌丝长势。 　　（2）最适pH值：加富PDA培养基在灭菌前分别用6 mol/L的盐酸或6