策略针对肿瘤细胞（严打应用各种细胞毒药物）针对瘤细胞课件.pptVIP

策略 针对肿瘤细胞（严打：应用各种细胞毒药物） 针对瘤细胞生存微环境（整治环境） 二、抗转移治疗的新策略 抗转移治疗的新方法 1、抑制肿瘤血管生成 即针对肿瘤血管形成的某些因子及其关键步骤进行干预。 ⑴ 抑制肿瘤细胞释放血管形 成因子， 如INF-α ⑵ 抗体阻断 如抗VEGF、 β-FGF ⑶ 抑制血管内皮细胞的分裂与 迁移,如烟曲霉素、TNP-470 Angiostatin、endostatin ⑷ 干扰内皮细胞分化成完整血管，防止新生血管与宿主血管吻合。 2、细胞粘附分子抑制剂与抗转移 （1）、阻止粘附信号的传递 如用蛋白酪氨酸激酶(PTK) 抑制剂。 （3）、增强E-cadherin介导的同质粘附。 （2）、抑制Integrins 依赖性的粘附 如 环孢霉素等。 3、蛋白酶抑制剂的应用 （1）、MMPs抑制剂 a 、batimastat, BB-94 为人工合成的小分子MMP 抑制剂，能与MMP活性基 团结合，能抑制MMP-2,9等。 b、marimastas,BB2516 为第二代人工合成MMP抑制剂，副作用小，病人耐受好等，能抑制多种MMP活性。 （2）、uPA 抑制剂如抗uPA抗体及多肽 4 、基因治疗 1、定义 基因治疗：将正常的外源基因导入生物体或人体靶细胞内以弥补所缺失的基因、或关闭或降低异常表达的基因，以达到治疗疾病的目的。 ⑴ 增强宿主抗癌免疫 ⑵ 恢复或增强抑癌基因的功能 ⑶ 阻断癌基因 ⑷ 增强化疗和放疗敏感性 ⑸ 细胞基因杀伤效应 (6) 基因调控治疗: 根据基因代谢通路进行上中下调节. 2、肿瘤转移基因治疗的策略 3.基因治疗的途径 1. ex vivo 途径: 将人体细胞从体内取出, 基因改造, 再移植到人体中. 自体,同种异体, 异种细胞, 同种异体或异种组织和器官等. 2. in vivo 途径: 直接将基因转移到人体中, 如DNA注射,口服, 喷雾等. 有如普通治疗药物, 商业化发展方向所在. 基因治疗的ex vivo 途径 基因治疗就与打针和吃药一样. 基因治疗的in vivo 途径 举例 nm23 gene TIMP gene 转染 高转移癌细胞 转移能力降低 三、肿瘤侵袭转移研究的基本策略与技术 （一）、研究策略 整体水平：人癌动物模型 自发性癌症动物模型 诱发性癌症动物模型 可移植性癌症动物模型（裸鼠，SCID小鼠） 转基因癌症动物模型 细胞水平（细胞培养、杂交瘤技术等） 裸小鼠特征： 外观无毛，裸体，皮肤薄，发育迟缓。 无胸腺 T细胞功能欠缺 无细胞毒效应，无移植排斥 成年鼠NK细胞活性增加 抵抗力低 11号染色体突变 SCID小鼠特征 (Severe Combined Immune Deficency) 外观正常 16号染色体突变，T、B缺陷 免疫学特征为T 、B细胞明显减少 细胞水平（细胞培养技术等） 组织水平研究 分子水平研究 染色体水平 DNA水平 RNA水平 蛋白水平 （二）、高通量技术在肿瘤研究中的应用 1、常用分子生物学技术的应用 重组DNA技术 PCR,RT-PCR,PCR-SSCP Southern blot,Northern blot Western blot HGP Celera 2、高通量技术的应用 染色体、DNA水平(Genomics):比较基因组杂交(CGH) RNA水平(Transcriptomics):差异显示(DD-PCR),抑制消减杂交(SSH)，基因表达系列分析(SAGE), 基因芯片(cDNA array). 蛋白质水平(Proteomics):2-D gel 比较基因组杂交(Comparative Genomic Hybridization,CGH) CGH 原理：将两种不同荧光标记的基因组DNA等比例与正常分裂中期染色体竞争杂交，分析每条染色体上荧光强度比率，推测待检DNA拷贝数变化。 基本方法： 正常中期染色体制备 基因组DNA分离 DNA标记 杂交和染色 荧光镜检和图象分析 应用： 确定肿瘤染色体区DNA扩增与丢失 对肿瘤进行分期与分级 诊断与鉴别诊断 预后与治疗反应 RNA水平(Transcriptomics)研究 差异显示(Differential display PCR, DD-PCR) 原理： 基因差异表达 用oligo-dT引导逆转录，再用随机引物和逆转录（锚定引物）扩增cDNA片段，PAGE胶分离，比较胶上差异条带识别差异表达基因。 操作步骤 样品RNA分离 反转录成cDAN PCR扩增 电泳 结果分析 DD-PCR S