高温应激对猪小肠上皮细胞损伤及石香颗粒的修复机制课件.pptVIP

石香颗粒对热应激猪空肠黏膜EGF/EGFR mRNA含量影响 （三）苍术、藿香挥发油对IEC-6高温下EGF、EGFR mRNA表达的影响及其信号转导机制 细胞株 IEC-6细胞株(CRL21592)，购自中国协和医药科技大学细胞保藏室。 主要药品与试剂 取本研究室制备的10 mg苍术挥发油包合物（β-桉叶油醇含量33.63%）； 10 mg藿香挥发油包合物（百秋李醇含量30.47%）、分别用5 mL DMEM完全培养液溶解后，经φ0.22μm滤膜过滤，上述溶液于4℃保存。 p44/42 MAPK (Erk1/2) (137F5) Rabbit mAb和Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (20G11) Rabbit mAb（Cell Signaling Technology, Inc.，USA） 试验设计 组 别 Groups IEC-6处理 每孔培养液组成 对照组 CG 37℃培养48 h 细胞悬液1.8mL+DMEM培养液 高温组 HTG 37℃,45h 41℃ ,3 h 苍术油组 RHAAG 细胞悬液1.8mL + 苍术油溶液 藿香油组 HAAG 细胞悬液1.8mL + 藿香油溶液 本课题前期研究成功的IEC-6细胞热应激模型41℃ ,3 h 高温对IEC-6细胞活力、细胞增殖指数的影响 组 别 Groups G0/1 期细胞 G0/1 cell (%) G 期细胞G cell (%) S 期细胞 S cell (%) 增殖指数 PI (%) 细胞活力 (OD570) 对照组 CG 74.2±3.1b 6.9±2.6a 18.8±3.9a 25.8±3.1a 0.757±0.010a 高温组 HTG 84.4±3.5a 4.7±1.8b 10.9±1.7c 15. 6±3.5c 0.737±0.005b 苍术油组 RHAAG 77.7±1.4b 6.0±1.2a 16.2±2.5ab 22.2±1.4a 0.750±0.008a 藿香油组 HAAG 80.1±0.8a 6.4±2.2a 13.5±1.5c 19.9±0.8b 0.754±0.005a 注：同列小写字母相同者代表组间差异不显著；不同者代表组间差异显著(P 0.05) IEC-6在高温中EGF/EGFR mRNA的变化及中药调控 中药对IEC-6在高温中P-ERK1/ERK2 的影响 四. 结论 热应激猪26～40℃循环高温模型成立。 石香颗粒通过调节猪体温，减少小肠上皮细胞、肠绒毛损伤，石香颗粒通过维护小肠黏膜屏障的完整性和营养吸收功能，发挥抗热应激作用。 热应激导致猪空肠基因表达差异。芯片HSP、 EGF及EGFRmRNA验证结果表明可靠。这些差异基因涉及机体内分泌、免疫功能、细胞损伤和修复、细胞凋亡、信号转导等。 Pathway分析预测花生四烯酸代谢途径、淀粉和蔗糖代谢途径、亚麻仁油酸代谢途径、细胞色素P450代谢途径和MAPK信号通路在热应激过程中发挥重要作用。 猪小肠黏膜损伤修复的基因信号通道与EGF介导的细胞的损伤，修复相关。石香颗粒主要成分通过显著促进对EGFR 的表达，启动基因转录，促进细胞增殖，损伤的修复。 五.有待进一步研究的问题 高温对猪空肠的基因差异表达基因为203个；其中上调有的93个；下调的有110个。 继续进行高温对猪热应激影响机制的研究，开发抗热应激和小肠黏膜损伤修复剂。 TCVM TEACHING RESEARCH TEAM * 高温应激对猪小肠上皮细胞损伤 及石香颗粒的修复机制DAMAGE OF HIGH TEMPERATURE STRESS ON INTESTINAL EPITHELIUM IN PIG AND REPAIR MECHANISMS OF SHIXIANG GRANULE 北京农学院 中国农业大学 刘凤华 许剑琴 TCVM TEACHING RESEARCH TEAM 汇报提纲 研究背景、目的 研究技术路线与方法 结果与分析 结论 有待进一步研究的问题 一、研究背景及目的 应激 夏季高温对养猪生产的影响 高温与胃肠道损伤修复 基因芯片在猪热应激中的应用 应激的种类 饲管因素 运输因素 环境因素 防治因素 中毒因素 心理因素 其他因素 随着全球性气候变暖，高温成为对家畜作用最广泛和不可避免的应激因素。 人工气候室高温模型符合试验因子单一化研究应激机制。 热应激 环境温度超过猪的等热区上限，猪体温超过39.5℃，产热大于散热。 免疫机能 生产性能 经济损失 生理指标 行为改变 胃肠道损伤 应激与应激性溃疡 应激性溃疡：应激中机体为了保护心、脑等重要器官，全身血液重新分