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通过心肌梗死干细胞实验，我们得出急性心肌梗死之后，粒细胞集落刺激因子促进骨髓源性间充质细胞的活化 2007;116;I-24-I-30 Circulation Rasmus Sejersten Ripa, Mandana Haack-S?rensen, Yongzhong Wang, Erik 一、研究背景 与安慰剂组对照得出，在心肌梗死后，粒细胞集落刺激因子对心脏的收缩功能没有影响。相反的，骨髓细胞的冠脉灌注似乎改善了射血分数。此实验目的在于评估粒细胞集落刺激因子对干细胞的活化作用。 二、研究现状 直接冠状动脉内注入骨髓穿刺来的细胞与药理学动员的骨髓来源的干细胞相比所表现的明显的矛盾结果仍不清楚。 REVIVAL-2实验和G-CSF-STEMI实验证实急性ST段抬高性心肌梗死后骨髓干细胞的动员，并没有改善左心室的收缩功能。 在急性心肌梗死后骨髓单核细胞直接灌注入冠状动脉，REPAIR-AMI实验证实左心室射血分数的重要改善 。 杰斯.詹森等人的的实验中，冠脉灌注骨髓单核细胞后只有局部收缩功能改善了。 三、研究目的 评估终点（一）通过心脏的核磁共振成像评估从第一天到六个月收缩期心室壁增厚的变化情况。（二）是通过核磁共振成像反应射血分数的变化情况。 研究目的（一）描述粒细胞集落刺激因子对细胞特别是对于间充质干细胞的动员情况。（二）细胞的血浆浓度和接下来心室收缩功能的改变之间的联系。 四、研究方法和结果 78名ST段抬高性心梗病人，在出现心梗症状后12小时内给予基本的介入治疗。随机双盲给予粒细胞集落刺激因子（0.01g/kg/d ）或者安慰剂。 7天后，粒细胞集落刺激因子动员了25*10 9个CD34+细胞到心肌膜内相对于安慰剂组的3*10 9个细胞；动员了4.9*10 11个推定的间充质干细胞生，而安慰剂组2.0*10 11（P＜0.001）。 四、研究方法和结果 在粒细胞集落刺激因子的治疗下，部分患者的CD34+细胞与白细胞比值增加了. 部分假定的间充质干细胞与白细胞比值有所降低。继而发现了在循环的间充质干细胞的数量和射血分数的改变之间负相关。然而，没有任何一个间充质细胞的亚型对于心脏收缩功能的恢复有独立的评估作用。 五、病人的选择标准 第一次出现ST段抬高性心肌梗死的78名患者。症状出现后12小时内成功进行了经皮冠状动脉介入治疗。 六、干细胞的定量和定性 通过流式细胞分选仪使用抗CD34和抗CD45定量测量循环中的CD34阳性细胞和血液中循环的CD34和CD45阴性间质干细胞的浓度。 使用单克隆抗体和多克隆抗体板进一步测定间质干细胞的特性。 六、干细胞的定量和定性 通过解析计算循环中CD45、CD34阴性细胞的总数和亚群数。 用一个荧光活化细胞分选系统评估细胞悬液。最后得到每个样本100000个细胞。当从解析中收集到足够数量的CD45、CD34阴性细胞，认为分析是有益的。 六、干细胞的定量和定性 在治疗后的一个周由血液提供给缺血后的心肌膜CD34阳性细胞和CD45、CD34阴性细胞平均数相似。 计算第一周细胞的平均血浆浓度为，然后我们估算一周之内流过梗死相关动脉的血流量(4800 mL/hr*24 hour*7 days).最后粗略估计一周内通过梗死相关动脉的细胞数，我们给每个病人用血浆细胞平均浓度扩大血流量。 七、血浆细胞因子 使用色度法酶联免疫吸附试剂盒重复测定血管内皮细胞生长因子A的血浆浓度和间质的细胞衍生因子1(SDF-1)的浓度。最低的测定范围是10 pg/mL for VEGF-A和 18 pg/mL for SDF-1。 八、心脏MRI 在开始时和治疗六个月时做MRI。做影像检查和随后的对比增强成像，通过一个1.5-T扫描仪获得。检查结果由一个独立的中心实验室分析。这个中心实验室不知道所有病人的资料。给安慰剂组的28个病人和G-CSF组31个病人分别做MRI。 九、统计分析 用U检验比较两组的细胞数。在双因子在对数转换之后ANOVA用重复的方法分析作为实验因素G-CSF的治疗对细胞的影响、SDF-1和VEGF-A的浓度作为次要因素对治疗组的影响，假定是正态分布。在所有的分析中用线性回归决定提供给缺血后心肌的细胞数和左室收缩功能改善之间的关系，包含治疗类型作为协变量。 十、细胞动员 G-CSF的治疗导致白细胞和CD34阳性细胞数的大量提升，开始G-CSF治疗后7天达到峰值，30天后恢复正常。 在G-CSF治疗组循环中的推定的间质干细胞(CD45-/CD34-)的数量增加了大约四倍. 附加表1、G-CSF诱导的细胞动员 十、细胞动员 图一表明：CD34阳性细胞数和CD45/CD34阴性细胞数与白细胞相关。在G-CSF治疗期间，CD34阳性细胞升高,而CD34/CD45阴性细胞降低。血液中CD45阴性CD