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实验四葡萄糖的测定
实验四 葡萄糖的测定（POD-GOP法）
一．实验目的
1. 掌握葡萄糖氧化酶—过氧化物酶法测定血糖；
2. 学习使用分光光度计；
3. 学习微量移液器的使用
二．实验原理
葡萄糖氧化酶(GOD)
葡萄糖+O2 葡萄糖酸+ H2O2
过氧化物酶(POD)
H2O2 + 酚 + 4-氨基安替比林 醌+ H2O+O2
红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比，在505nm有吸收峰
三．试剂
1. 试剂1：
磷酸盐缓冲液 70mmol/L
酚 10.6mmol/L pH 7.0
2. 试 剂2：
磷酸盐缓冲液 70mmol/L
4-氨基安替比林 0.8mmol/L
葡萄糖氧化酶 10U/ml
过氧化物酶 1U/ml pH 7.0
3. 标准葡萄糖溶液 5.55mmol/L
4. 兔子血清
四．操作步骤
配制工作液：取等量试剂1和试剂2混合均匀
按下表加入有关试剂
空白管 标准管 样品管 工作液(ul) 3000 3000 3000 蒸馏水(ul) 20 -- -- 标准葡萄糖(ul) -- 20 -- 样品(ul) -- -- 20 3. 充分混匀，置于37℃水浴15分钟，显色后，在波长505nm处，以空白调 零，读取标准管和样品管的吸光值A
4. 实验结果计算：
葡萄糖（mmol/L）
=[样品管吸光度（A样）/标准管的吸光度（A标）]×标准液浓度
五．实验数据及结果
1.数据记录
空白 标准 样品 吸光度（A） 0 0.237 0.489 2.计算结果
葡萄糖=0.489/0.237*5.55mmol/L=11.45mmol/L=206.35mg/dl
思考题
哪些方法可增加血糖测定的准确性？
答：1.增加测定的重复次数
2.加样的准确，如在使用微量移液器量取液体时要称量准确，向试管中加液的顺序要正确
3.可根据所得数据绘制标准曲线，并通过标准曲线求出浓度
4.在使用分光光度计时注意操作准确
以上的这些方法都可以增加血糖测量的准确性
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