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紫菜叶绿素铜钠盐制备及其稳定性研究 　　摘要：以紫菜为主要原料制备叶绿素铜钠盐，设计单因素试验和正交试验等优化叶绿素铜代反应条件及皂化条件，并对紫菜叶绿素铜钠盐的稳定性进行研究。结果表明，紫菜叶绿素铜钠盐制备的最佳工艺条件为叶绿素铜化时间12 h、浸提温度50 ℃、浸提时间2 h，丙酮与乙醇体积比6∶4的混合液作浸提液溶剂，液料比V溶剂∶m紫菜=60∶1 （mL/g）；皂化温度60 ℃、皂化时间40 min以上、皂化液pH 11.51～11.93。稳定性试验表明紫菜叶绿素铜钠盐耐光性较差，在室温、pH 8～12时稳定性较好，高于80 ℃的温度和强酸强碱会导致紫菜叶绿素铜钠盐变性，食盐、白砂糖、淀粉等常见食品添加剂对其无不良影响。 　　关键词：紫菜；叶绿素铜钠盐；制备；稳定性 　　中图分类号：TS264.4；S985.4+2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）03-0639-06 　　叶绿素是常用的天然色素之一[1]，除被广泛用作食品、化妆品的着色剂与脱臭剂外，还因其具有抗诱变、抗氧化等活性[2]，在医药上可被用来治疗传染性肝炎、胃及十二指肠溃疡、慢性肾炎及急性胰腺炎，增进造血机能及促进放射线损害机体的康复[3-7]。生活在海洋中的藻类由于水中可被利用的光能比陆地上少得多，要完成能量的转移必须增加参与光合作用的叶绿素的含量[8]，所以海洋植物中叶绿素含量常常高于陆生植物。从理论上来说利用海洋植物来提取叶绿素，可以获得较高的提取效率。由于天然叶绿素遇热、光、酸、碱等易分解，且不溶于水，故不易保存，应用受限。近年来对天然叶绿素进行改性使其变成稳定的金属卟啉结构倍受关注，改性后的叶绿素铜钠盐是其金属卟啉结构中最重要的种类之一，基本原理是叶绿素分子中的Mg在酸性条件下被Cu取代，生成叶绿素铜代盐，叶绿素铜代盐在碱性条件下经过皂化生成叶绿素铜钠盐。叶绿素铜钠盐具有很高的稳定性，是一种安全无毒、水溶性好的天然食用色素[3]，除具有叶绿素的用途外，还可作光电转换材料等[9]。 　　本研究以紫菜为主要原料，以丙酮—乙醇混合溶剂为提取剂，采用溶剂浸提法提取叶绿素[10]，制备叶绿素铜钠盐，并对其稳定性进行研究，以期为海洋资源的综合利用和天然叶绿素产品的开发提供参考。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料与仪器 　　紫菜购于福建省厦门市集美区石鼓路菜市场。主要试剂硫酸铜、氢氧化钠、盐酸、乙醇、丙酮、硫酸铜晶体（CuSO4·5H2O）均为分析纯；食盐、白砂糖、淀粉均为食品级。 　　主要仪器与设备有723PC紫外可见分光光度计（美国BECKMAN公司）、pH 211酸度计（北京哈纳科仪科技有限公司）、RE-52AA旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）、HH-6数显恒温水浴锅（常州国华电器有限公司）、DHG-9146A电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏试验设备有限公司）、FA1004电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）、KQ5200D数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）、FW100高速万能粉碎机（天津泰斯特仪器有限公司）。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 紫菜叶绿素铜钠盐的制备方法 称取2.0 g紫菜于试管中，用50 g/L CuSO4溶液（pH 3.51）铜化12 h后洗涤脱水于锥形瓶中，加入丙酮—乙醇混合液（V丙酮∶V乙醇=6∶4）120 mL，在室温下浸提2 h，过滤得紫菜叶绿素铜代盐的浸提液。浸提液浓缩后加入50 g/L氢氧化钠溶液，调pH为11.51～11.93，在60 ℃水浴锅中加热回流皂化40 min以上，用石油醚萃取后静置分层，将萃取后的叶绿素铜钠盐于水浴锅中浓缩成盐，干燥后得到墨绿色带金属光泽的叶绿素铜钠盐。 　　叶绿素铜钠盐得率=紫菜叶绿素铜钠盐粗产品质量/紫菜质量×100% 　　1.2.2 紫菜叶绿素铜代盐和铜钠盐吸收光谱图的绘制 ①紫菜叶绿素铜代盐的吸收光谱图。用移液枪吸取1 mL紫菜叶绿素铜代盐浸提液于10 mL的容量瓶中，用丙酮—乙醇混合溶剂（V丙酮∶V乙醇=6∶4）稀释至刻度，并以此溶剂作参比，用紫外可见分光光度计在360～680 nm波长范围内扫描。②紫菜叶绿素铜钠盐的吸收光谱图。取叶绿素铜钠盐粗品0.1 g加蒸馏水溶解，移入100 mL容量瓶中用蒸馏水定容，再分别取1、2、3 mL用蒸馏水定容于10 mL容量瓶中，以蒸馏水作参比，用紫外可见分光光度计在360～680 nm波长范围内扫描。 　　1.2.3 紫菜叶绿素铜代盐制备条件的优化 ①浸提溶剂。分别以95%乙醇（体积分数，下同）、95%丙酮、95%甲醇、丙酮—乙醇混合液（V丙酮∶V乙醇=95∶5）为浸提溶剂，按试验方法制备紫菜叶绿素铜代盐浸提液。②浸提溶剂丙酮—乙醇混合液体积比。分别按V丙酮∶V乙醇=1∶9、2∶8