脂滴结合蛋白通分子蛋白介导的自噬降解帮助脂肪分解.docxVIP

细胞与医学遗传学实验文献翻译文献标题：Degradation of lipid droplet-associated proteins by chaperone-mediated autophagy facilitates lipolysis期刊来源：nature cell biology脂滴结合蛋白通过分子蛋白介导的自噬降解帮助脂肪分解Susmita Kaushik1,2 and Ana Maria Cuervo分子蛋白介导的自噬（CMA）能够选择性地在溶酶体中降解胞浆蛋白的一个亚型。营养剥夺能够有效激发分子蛋白介导的自噬，同时细胞内储存的甘油三酯或脂滴也会水解（脂解）来产生自由脂肪酸来供能。在本文中，我们将介绍：脂滴结合蛋白perilipin 2(PLIN2) 和perilipin 3(PLIN3)是分子蛋白介导的自噬作用的底物，并且这两种蛋白通过这一途径进行的降解发生在脂解之前。活体实验揭示了PLIN2和PLIN3通过分子蛋白介导的自噬途径发生的降解在饥饿状态增强，同时伴有脂肪组织甘油三酯水解酶和巨自噬蛋白对脂滴的高作用水平。分子蛋白介导的自噬。在培养的细胞或老鼠肝中阻断分子蛋白介导的自噬或抗CMA的PLIN蛋白的表达会导致脂肪组织甘油三酯水解酶和脂自噬相关蛋白与脂滴的结合，继而导致脂质氧化的减少和脂滴的堆积。我们认为分子蛋白介导的自噬对于脂滴生物学及对脂肪动态平衡的维持有重要作用。自噬作用通过在溶酶体内降解蛋白质、脂质和细胞器维持了细胞的动态平衡。失去作用的细胞器通过自噬而更新确保了质量的控制，降解产物的再利用能为机体提供能量。在分子蛋白介导的自噬作用（后文均记作CMA）中，热休克蛋白70同源蛋白（hsc70）通过五肽模体识别蛋白并把蛋白运转到溶酶体表面，与溶酶体相关膜蛋白2A（LAMP－2A;L2A）结合，这是CMA作用的限速步骤。L2A组装成多聚体复合物，和溶酶体中的hsc70一同介导未折叠底物转移到溶酶体中进行降解。CMA在哺乳动物大部分细胞中均存在，并且在长时间饥饿、温和的氧化胁迫、组织缺氧和脂肪合成后被最大程度地激活。溶酶体对LAMP-2A稳定性的降低会导致衰老细胞器CMA活性的降低。除了已有良好定性的通过自噬的细胞更新，脂质也可通过巨自噬进行降解，通过内吞作用进入双膜囊泡（自噬体）并与溶酶体融合。自噬介导的脂解选择性地靶向脂质，脂质是细胞内作为能量储备的脂肪储存，能通过水解甘油三酯为游离脂肪酸来供能。脂滴被peripilin（PLIN）家族的结构蛋白包围，PLIN1主要存在与脂肪细胞，PLIN2和PLIN3在各种细胞中广泛存在。脂解能够在胞浆脂酶如ATGL的催化下进行，也能在溶酶体腔内的脂酶作用下进行，后者发生在自噬相关蛋白在脂滴表面装配形成自噬体，吞噬部分脂滴并将其定位进入溶酶体。尽管CMA只能降解蛋白质，不能降解脂肪，但肝脏CMA受到阻断的老鼠表现出确定的脂肪变性，即使非选择性的巨自噬功能完好。由于脂肪合成酶通过CMA降解减少而导致的分散的脂肪合成的增加不足够解释老鼠肝脏的大量脂肪堆积。这一发现，加上在诸如肝等组织，脂质的大量涌入，脂解和CMA达到最大速率激活发生在饥饿状态；而CMA活性随年龄增长而降低，常伴随发生细胞内的脂堆积，促使我们来进一步研究CMA在调控脂肪动态平衡中的作用。本文中，我们展示了在细胞内和老鼠肝，CMA的阻断均会减少脂滴的溶解。在增强脂解的条件下，CMA降解脂滴相关蛋白PLIN2和PLIN3，这还有助于脂滴结合胞浆脂肪酶ATGL及巨自噬相关蛋白ATG。减少的CMA会阻碍脂肪分解所需物质的补充，因此我们认为CMA对脂滴巨自噬和胞浆脂解是重要的上游调控。结果LAMP-2A缺陷细胞出现脂滴堆积现象我们使用了在肝细胞中敲除LAMP-2A（L2AKO）的老鼠肝脏和敲除了L2A的老鼠成纤维细胞（L2A(-)）来阻断CMA。借此我们证实了，尽管和肝细胞相比，成纤维细胞对脂肪代谢的需求很小，L2A缺乏的成纤维细胞比对照组显著地有更多甘油三酯堆积。当我们在培养基中减少葡萄糖或给予脂肪生成的刺激（OL）时，细胞内对脂肪的利用被刺激，甘油三酯水平的差异更显著。与对照组相比，我们在L2AKO组老鼠的L2A敲除细胞仅发现了微小的甘油三酯合成增加的趋势。与之相反，L2A(-)细胞表现出有显著差异的β氧化速率的降低，这是甘油三酯水解的下游反应，基态或脂肪生成的条件下均如此；此外，L2A(-)细胞无法在OL暴露下加快氧消耗的速率（OCR）。L2A(-)细胞降低的β氧化速率本质上不是由于线粒体缺陷，因为具有完好的膜电位的线粒体百分数以及线粒体更新和CTR细胞是相似的。对照组和L2A(-)细胞β氧化速率的差异在乙莫克害存在下显著减少，这暗示出现脂滴堆积在本质上是由于脂肪动员出现问题，而非氧化步骤的问题。与L2AKO老