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海绵体神经损伤致阴茎组织结构改变及其机制的研究 胡万里 胡礼泉 武汉大学中南医院泌尿男科学研究中心 本研究通过建立大鼠双侧CN切除模型，观察大鼠双侧CN切除对阴茎组织TGF-β1 表达的影响及海绵体组织中平滑肌和胶原纤维含量的变化，以阐明CN损伤致阴茎病理变化的分子机制。 方法 实验动物及分组 ： 阿朴吗啡试验 ： F-actin 荧光染色和共聚焦显微镜观察 Masson 三色染色 免疫组织化学染色 半定量 RT-PCR 蛋白质印迹分析 统计学处理 结 果 阿朴吗啡试验结果：所有假手术组大鼠在30min内均有2次以上的阴茎勃起，勃起反应率为 100% ；而双侧CN切除组大鼠阴茎均未出现任何勃起反应，勃起反应率为 0% 。 免疫组织化学染色结果 :见图3-1和图表3-1 Masson 三色染色结果：见图3-3、表3-3和图表3-2。 讨 论 Fraiman 和Savoie均报道[3-4]，许多前列腺癌根治术患者术后不仅勃起功能丧失，而且出现阴茎尺寸变小的现象；User亦报道[5]，大鼠双侧CN切除后，阴茎组织出现细胞凋亡且阴茎重量变小。这些研究结果表明，阴茎在失去CN的支配后，不仅性冲动的传导受阻而直接使阴茎丧失自主勃起能力，而且在远期阴茎的组织结构亦会发生病理性改变。 TGF-β1是一种与组织纤维化密切相关的细胞因子，Moreland研究证实，缺氧可促使培养人阴茎海绵体平滑肌细胞表达TGF-β1，从而诱导合成较多的胶原蛋白；而前列腺素E1(PGE1)可抑制TGF-β1诱导的人海绵体平滑肌细胞胶原的合成。1998年，Moreland 又进一步发现，低氧在诱导TGF-β1表达增加的同时，抑制PGE1的合成。 正常的青壮年男性每晚约有3~5个阶段的夜间阴茎勃起（NPT）, 每次持续大约30~45min[10]。 有研究证实，阴茎在疲软的状态下，海绵窦内的血氧分压只有25~40mmHg, 而在勃起时则达到90~100mmHg[11]。因此阴茎每晚长达1.5~3.0 h的NPT对于提高海绵体内的血氧分压，防止阴茎纤维化，维持阴茎正常的勃起功能有重要的意义。 阴茎在失去自主神经的支配后，由于高位中枢的性冲动无法传达到阴茎，阴茎将直接失去自主勃起能力（包括夜间阴茎勃起和反射性阴茎勃起）而长期处于疲软状态。因此我们推测，CN因手术或外伤损伤后，阴茎组织出现病理变化的分子机制与TGF-β1的表达增加诱导胶原纤维的合成增多有一定的关系。 本研究结果表明CN损伤可以导致TGF-β1在转录和翻译水平的表达均增高。 我们还用F-actin特异性的荧光染色剂罗丹名标记的Phalloidin，对阴茎组织中的平滑肌荧光染色，在共聚焦显微镜下同时观察Phalloidin发出的荧光和组织中胶原纤维的自发荧光，并进行定量分析；。结果表明，CN切除后，阴茎海绵体组织中胶原纤维的含量明显增多，而平滑肌的相对含量则相对减少，即海绵体组织出现纤维化的表现。Masson 三色染色结果也得出了类似的结论。 因此我们可以认为，CN损伤后，阴茎组织纤维化的发生与TGF-β1的表达增高密切相关，而TGF-β1的高表达是因阴茎长期疲软组织缺血缺氧诱导产生的。 结 论 阴茎完全去自主神经支配后，海绵体组织会出现纤维化的改变，这种改变与阴茎组织中TGF-β1表达增高密切相关； CN损伤导致阴茎组织TGF-β1表达增高可能是阴茎长期疲软而致缺血缺氧的结果。 * * A B 图3-1 免疫组织化学染色显示海绵体组织中TGF-β1的表达。A为神经切除组大鼠，B为假手术组大鼠。比例尺=10μm。 图表3-1 免疫组织化学染色显示TGF-β1在两组大鼠海绵体组织表达强度的比较 A B 图3-2阴茎海绵体组织经TRITC-Phalloidin 荧光染色后在共聚焦显微镜下观察到的结果。红色为Phalloidin与平滑肌中F-actin特异性结合发出的荧光，绿色为胶原纤维的自发荧光。A和B分别为神经切除组和假手术组大鼠一侧阴茎海绵体组织的染色结果（比例尺=100μm）。 F-actin 荧光染色和共聚焦显微镜观察结果： 表3-2 平滑肌与胶原纤维光密度加权值之比 神经切除组 假手术组 SM CF SM/CF SM CF SM/CF 8.01ⅹ106 29.2ⅹ106 0.35 5.64ⅹ106 5.81ⅹ106 0.97 2.36ⅹ106 18.8ⅹ106