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甘薯WRKY基因家族序列分离与鉴定 　　摘要：根据WRKY基因家族序列的保守区域设计简并引物，从甘薯（Ipomoea batatas L.）品种徐薯18中扩增出WRKY基因家族，经克隆、测序后得到15条WRKY基因家族序列，其编码的氨基酸序列包含有WRKY基因家族所具有保守的WRKYGQ和TTYEGKH（T/N/S/G/A/D）（H/Q）区。对甘薯WRKY基因家族氨基酸序列与部分植物WRKY基因家族氨基酸序列进行聚类分析，发现其聚为5类，相似性较高，推测各类中相似性较高的序列分别属于同一个基因家族。 　　关键词：甘薯（Ipomoea batatas L.）；WRKY基因家族；简并引物；分离；鉴定 　　中图分类号：S531 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）17-4241-04 　　Isolation and Identification of WRKY Gene Family from Sweet Potato 　　WANG Lian-jun，LEI Jian，SU Wen-jin，YANG Xin-sun 　　（Institute of Food Corps， Hubei Academy of Agricultural Sciences， Wuhan 430064， China） 　　Abstract：The degenerate primers designed from the conserved motifs in the WRKY gene family were used to amplify WRKY gene family from Ipomoea batatas， Xushu18. 15 WRKY gene family were obtained according to cloning and sequencing， and the amino acid sequence contained WRKYGQ and TTYEGKH（T/N/S/G/A/D）（H/Q） motifs of the WRKY. Cluster analysis of the predicted amino acid sequences grouped the WRKY of Ipomoea batatas and the known WRKY in NCBI database into five classes， and the sequence similarity was high. It was deduced that the RGAs with high similarity belonged to one gene family. 　　Key words： sweet potato（Ipomoea batatas L.）； WRKY gene family； degenerate primers；isolation；identification 　　收稿日期：2013-07-16 　　基金项目：公益性科技研究项目（2012DBA53001）；国家现代甘薯产业技术体系建设项目（CARS-11-C-15）；湖北省农业科技创新中心资助项目 　　（2007-620-001-03）；湖北省农业科学院青年基金项目；湖北省农业科学院特色学科项目 　　作者简介：王连军（1982-），男，河南新乡人，助理研究员，博士，研究方向为植物遗传育种，（电话电子信箱）wanglianjun10@163.com； 　　通讯作者，杨新笋，男，研究员，主要从事甘薯育种与栽培研究工作，（电子信箱）yangxins013@163.com。 　　甘薯（Ipomoea batatas L.）是世界上重要的粮食、饲料、工业原料及新型能源用块根作物。中国是世界上最大的甘薯生产国，常年种植面积550万hm2，鲜薯产量约1.2×108 t，分别占世界甘薯种植总面积和总产量的60%和85%[1]。甘薯在遗传上高度杂合，种内、种间杂交不亲和、遗传资源匮乏，遗传基础狭窄以及病虫害、病毒病危害严重，严重制约了甘薯品种的遗传改良[2]。近年来，许多研究表明通过基因工程手段能够改善甘薯的抗病和抗逆能力[3-6]。WRKY转录因子是近年来在植物中发现的一类锌指型转录因子基因家族，其序列的N-端含有高度保守的WRKYGQ氨基酸序列。WRKY转录因子能够与C/TTGACC/T序列（W-box）发生特异性结合，从而调节基因的表达[7]。WRKY转录因子广泛参与植物对生物和非生物胁迫应答反应，包括对根结线虫、真菌、病毒、NaCl、PEG、低温、高温、机械刺激以及低磷等逆境胁迫因子的响应[8-20]。另外，也有研