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不同培养基对马铃薯茎尖分生组织生长影响 　　摘要 将云南师范大学薯类作物研究所提供的合作88号马铃薯品种的发芽块茎，进行茎尖剥离脱毒和组织培养诱导，研究添加不同浓度激素的培养基对合作88号茎尖分生组织生长的影响。试验结果表明，对合作88号茎尖分生组织培养较适宜的培养基为MS+0.1 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA+0.1 mg/L GA3+30 g/L白糖+4.0 g/L琼脂粉+100 mg/L肌醇，形成的愈伤组织状态好、成苗率高。 　　关键词 马铃薯；茎尖；组织培养；培养基；生长；影响 　　中图分类号 S532 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2013）05-0101-01 　　普通栽培种的马铃薯（Solanum tuberosum L.）是双子叶种子植物，属茄科（Solanacea）茄属（Solanum），一年生喜凉草本植物，原产于南美洲，马铃薯在生产上绝大多数是利用马铃薯块茎进行无性繁殖，是我国四大粮食作物之一。世界马铃薯面积分布的最大特点是以欧、亚两洲种植为主，两者种植面积占世界马铃薯总面积的78%。其中，中国、俄罗斯、乌克兰和印度四大生产国，占世界总种植面积的1/2[1]。国际马铃薯中心（CIP）和国际食品政策中心（IDPRI）合作研究表明，到2020年全世界对马铃薯的需求将有望增长40%[2]，超过水稻、小麦和玉米的增长，特别是亚洲和非洲对马铃薯的需求将增长更快。近年来，随着我国农业产业结构调整和种薯、商品薯、加工企业市场的发展，优质马铃薯加工产品供不应求，加工用薯比例大幅度增加，马铃薯栽培成为种植业结构调整和农民增收的一项战略选择，且马铃薯种植也逐步走向规模化、标准化和区域化。 　　马铃薯为块茎无性繁殖作物，在生长期间易受病毒侵染，且病毒会在种薯块茎中逐代累积，使马铃薯种薯的种性发生退化[3]。而种薯“退化”是马铃薯产量降低和商品性状变差的主要原因[4]。有研究表明，病毒在植株体内的分布是不均匀的，且越靠近新生组织部位的（如茎尖）病毒越少，甚至无毒。目前，国内外研究者即根据这个原理，利用无菌操作，通过马铃薯茎尖分生组织的离体培养，获得无病毒或脱去马铃薯主要危害病毒的试管苗[5-7]，从而恢复马铃薯的种性。植物茎尖分生组织培养的成活和发育，需要适宜的培养基及一定条件的温度和光照，且植物生长调节剂在其中发挥了重要作用[8]。为此，本试验探讨了添加不同浓度激素的培养基，对马铃薯合作88号品种的茎尖分生组织生长及成苗的影响。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　试验材料为云南师范大学薯类作物研究所提供的马铃薯优良品种合作88号的发芽块茎。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 培养基的配制。按照如下培养基配方，配制4种培养基，分别为：MS+0.5 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA+30 g/L白糖+7.0 g/L琼脂粉（A）；MS+0.1 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA+0.1 mg/L GA3 +30 g/L白糖+4.0 g/L琼脂粉+100 mg/L肌醇（B）；MS+1.0 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA+0.5 mg/L GA3 +25 g/L白糖+6.0 g/L琼脂粉+100 mg/L肌醇（C）；MS+0.05 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0.1 mg/L GA3 +25 g/L白糖+4.5 g/L琼脂粉+100 mg/L肌醇（D）。 　　1.2.2 取材与消毒。剪取发芽块茎上1～2 cm长的芽，用软毛刷在自来水下轻轻逐个刷洗后放于烧杯中，然后放于超净工作台内进行严格消毒：先用75%的酒精浸15 s，无菌水冲洗2次，每次3～5 min；再用0.1%的升汞消毒8～10 min，无菌水冲洗5次，每次3～5 min。冲洗完后放在灭过菌的培养瓶内待用，注意滴加少量无菌水，以防茎尖脱水萎缩。 　　1.2.3 剥离茎尖、接种。将消毒过的芽置于40 X的解剖镜下，用灭过菌的解剖针仔细剥离茎尖外叶，直至露出圆润的生长点，然后用锋利的无菌解剖针小心切取0.5 mm以下的带1～2个叶原基的茎尖，随即将茎尖分别接种于已准备好的培养基A上，以切面接触培养基。每瓶培养基接种3个茎尖，共接种60瓶左右。此阶段为过渡培养，目的是使各个茎尖分生组织处于相同的起始条件下。 　　1.2.4 对比试验。1个月左右，当茎尖愈伤组织长至米粒大小，或有绿色突起时，就把这些茎尖随机转接到培养基A、B、C、D中，以切面接触培养基；每瓶培养基接种3个茎尖，每种培养基接种10瓶；每隔7 d观察、记录1次，主要记录各种培养基内茎尖的生长情况。 　　1.2.5 培养条件。将接种好的茎尖置于温度20～23 ℃，光照强度1 800～2 00