不同生境下苹果树腐烂病菌有性态发生及生物学特性研究.docVIP

不同生境下苹果树腐烂病菌有性态发生及生物学特性研究 　　摘 要： 【目的】为了明确苹果树腐烂病菌有性态在不同生境条件下的发生情况及生物学特性，【方法】以甘肃省6市11县（区）不同生境条件下患病的苹果树病皮为试验材料，对苹果树腐烂病菌有性态的形态学、形成时间、侵染性和子囊孢子萌发条件进行研究。【结果】甘肃省苹果树腐烂病原菌有性态为Valsa ceratosperma （Tode et Fr） Maire，仅分布在甘肃东部气候较湿润的天水、平凉、庆阳3地，形成时间天水在8月中下旬，平凉和庆阳在9月中下旬。平凉菌株子囊壳埋藏最深，达809.85 μm，与天水、庆阳菌株差异显著。三地的有性态子囊孢子在最适条件下均可萌发，36 h内不同光照条件下，各地子囊孢子的萌发率差异不显著。子囊孢子在不同光照和不同营养条件下都能萌发，以全黑暗条件下和PDA培养基上的萌发率最高。【结论】苹果树腐烂病菌有性态分布在气候较为湿润、年平均温度较高的地区，有性态无侵染性，光照和营养条件对子囊孢子萌发有显著影响。 　　关键词： 苹果树腐烂病； 有性态； 生境； 发生； 生物学特性 　　中图分类号：S661.1 文献标志码：A 文章编号：1009-9980？穴2013？雪04-0644-06 　　苹果树腐烂病是世界上危害苹果最为严重的病害之一，该病可造成树势衰弱、苹果品质和产量下降，严重时甚至可造成毁园[1]。甘肃省是全国苹果生产的优势产区和第2大省，截止2011年底，全省苹果挂果面积30.7万hm2，产量220万t，产值约60亿元[2]。但近年来，苹果树腐烂病发生日趋严重，已成为制约全省苹果产业健康持续发展的重要因素。据甘肃省植保植检站调查，2011年全省发病面积达7.5万hm2， 平均发病株率达40%左右，白银、天水、平凉、庆阳、陇南等地老果园发病严重，树势衰弱的果园可达60%左右。如何更好地防治该病，环境条件和致病菌的研究是关键。关于苹果树腐烂病原菌的研究国内外已有很多报道，但主要针对其无性态[3-5]，而有性态由于在田间比较少见，相关研究报道较少。最早关于有性态报道的是在1909年，日本学者宫部和山田[6]将苹果树腐烂病菌定为Valsa mali Miyabe et Yamada，Nakata[7]1941年研究发现中国北部苹果树腐烂病菌为 V. mali，Kobayashi[8]根据病原菌形态，主张将苹果树腐烂病菌学名V. mali改为V. ceratosperma （Tode et Fr） Maire，Hayova等[9]曾提及Valsa malicola Z. Urb在中国可能有分布，王旭丽等[10]研究证实黑龙江和陕西苹果树腐烂病菌有性态分别为Valsa ceratosperma （Tode et Fr） Maire和V. malicola Z. Urb。对不同生境条件下苹果树腐烂病发生情况，谢红江等[11] 分析了苹果腐烂病发生程度与树龄、品种、立地条件、季节及气候因子的关系。目前，国内关于苹果树腐烂病菌有性态在不同生境条件下的发生及生物学特性方面研究尚未见系统报道。为此，本研究选取了甘肃省有代表性生态区域的苹果生产区，对不同立地条件下苹果树腐烂病菌有性态的地域分布、发生、侵染性及生物学特性进行研究，旨在为探索病害流行规律及下一步防治工作奠定理论基础。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 　　1.2 方法 　　1.2.1 有性态形态学观察 取患病苹果树病皮，徒手切片，观察子座、子囊壳、子囊、子囊孢子的形态。测量不同地区有性态子囊壳的宽度、瓶颈的长度和埋藏深度。 　　1.2.2 有性态与无性态比例 取14个地区的患病苹果树病皮，每个地区采集的病皮中随机抽取50个样点，每个样点1 cm2，进行徒手切片，每个样点20片。统计各个地区有性态和无性态的片数，得出有性态与无性态片数的比例。 　　1.2.3 子囊孢子悬浮液的制备 参照方中达[12]制备孢子悬浮液方法，取患病苹果树病皮，剔除周围的组织，放在载玻片上，用刀片剖开，放在离心管中加无菌水，离心，弃去底部沉淀，即得到孢子悬浮液，并用无菌水稀释至每视野（10×40）20～30个孢子，用血球计数板统计孢子浓度。 　　1.2.4 分生孢子纯培养的制备 使用琼胶平板稀释纯化法[12]，用无菌水将树皮上溢出的分生孢子角洗下，稀释到每视野有5个左右的孢子，将稀释后的孢子悬浮液涂在PDA平板上，等长出单一菌落后，用打孔器打取单一菌落转接到新PDA平板上，在PDA上得到纯培养。 　　1.2.5 有性态的侵染性研究 选取1～2年生健康的苹果树枝条，截成15 cm的小段，用自来水冲洗干净，枝条顶端石蜡封顶，接种时用脱脂棉蘸取75%的酒精擦洗灭菌，然后用灭菌水冲洗3次、风干，用直径 5 mm铁钉