胚胎移植的生理基础、原理及运用.ppt

主要内容 一、女性生殖生理 二、胚胎移植技术 三、转基因技术 四、基因敲除技术 五、核移植与动物克隆 一、女性生殖生理 （一）女性一生中各阶段的生理特点 新生儿期(neonatal period) 儿童期(childhood) 青春期(adolescence or puberty) 性成熟期(sexual maturity) 围绝经期(perimenopause) 绝经后期及老年期(postmenopause,senility) ?青春期(10岁~19岁) 自第二性征开始发育至生殖器发育成熟的时间 第二性征 生长突增 生殖器官发育 月经初潮 生育能力 ?性成熟期 18岁起持续约30年 卵巢排卵和性激素分泌呈周期性 生殖器官和乳房周期性变化 生育功能旺盛 ?女性生殖轴 下丘脑-垂体-卵巢轴 （hypothalamus-pituitary-ovary axis，H-P-O axis） ?下丘脑 促性腺激素释放激素 (Gonadotropin Releasing Hormone，GnRH) ?垂体 促性腺激素(Gonadotropin) ?促卵泡激素 (Follicle Stimulating Hormane，FSH ) ?黄体生成激素 (Luteining Hormane，LH) ?催乳素(prolactin,PRL) 下丘脑-垂体解剖联系 与垂体的解剖联系 垂体门脉系统 下丘脑中央隆突 （第一微血管丛） 垂 GnRH 体 柄 垂体前叶细胞周围 第二微血管丛 初级卵母细胞完成第一次成熟分裂，产生一个较大的次级卵母细胞和一个极体。次级卵母细胞随即进入第二次成熟分裂，但停止于分裂中期。 卵排出后若在24小时内与精子相遇受精，次级卵母细胞则继续完成第二次成熟分裂，形成一个成熟的卵细胞和一个小的第二极体 二、胚胎移植技术 胚胎移植(Embryo transfer)也称受精卵移植，是指将母畜配种后的早期胚胎取出，或者由体外受精及其他方式获得的胚胎，移植到另一头同种的生理状态相同的母畜体内，继续发育成为新个体。 提供胚胎的个体称为------供体（donor） 接受胚胎的个体称为------受体（recipient） 早在1878年，德国人Scnenk就以家兔和豚鼠为材料，开始探索哺乳动物的体外受精技术，但一直没有获得成功。1891年，英国剑桥大学的赫普（Walter Heape）就在免子身上首次成功地进行了受精卵移植实验。 20世纪30年代，一些学者用实验动物如鼠、兔等作受精卵或胚胎移植的研究并获得成功。以后又在绵羊、山羊、猪、牛和马等家畜进行胚胎移植实验，相继获得成功。 胚胎移植的主要步骤： 1. 超数排卵 2. 同期发情 3. 胚胎收集和预处理 4. 胚胎移植 图11-2 移卵管吸取胚胎 代孕动物的寻找－同期发情技术 鼠类： 受体母鼠(普通发情母鼠)与结扎公鼠合笼，第二天早上检查阴道栓，有栓的母鼠 可用于胚胎移植。 大动物： 如山羊绵羊等动物主要采用前列腺素类的激素如用15-甲基PGF2α或氯前列烯醇等 激素使黄体溶解来达到同期发情的目的。 胚胎移植 小鼠麻醉、剪毛、消毒后，用手术剪切开小鼠的皮肤、肌肉、打开腹腔，暴露卵巢、卵巢脂肪垫，并用镊子夹住脂肪组织，把卵巢、输卵管和一部分子宫角慢慢拉出，通过用纱布保护的切口置于纱布上。 （ 胚胎移植技术的应用 研究生殖过程的影响因素； 体外受精技术的基础； 转基因/基因敲除基础技术； 微生物净化的基本手段； 缩短繁殖周期,增加一生繁殖的后代数量。 三、转基因技术 转基因动物 转基因动物(transgenic animals) 把外源基因导入到动物体内，这种外源 基因与动物本身的染色体整合，这时外 源基因就能随细胞的分裂而增殖，在体 内得到表达，并能传给后代。 转基因动物研究简史 1. 追溯20世纪60年代末和70年代初就有人向蛙 卵和小鼠胚胎注射mRNA，研究mRNA能不能在动物卵细胞和早期胚胎 中翻译。 2. 1974年，Jaenisch和Mintz首次报道应用显微注射法获得SV40DNA转基因小鼠。 3. 1982年Palmiter成功获得了含金属巯基(MTI)基因启动子与大鼠生长基因的融合基因的转基因小鼠。体重远大 于正常对照，被称为“超级小鼠”(Supermice)。 4. 82年以后，转基因技术得到了大力的推广和研究，至今已制备出小鼠、大鼠、鸡、兔、猪、羊、鱼等