肝衰竭研究进展课件.ppt

内科学（传染病）国家重点学科 传染病诊治国家重点实验室 转染 筛选 正常人肝细胞 生物学功能鉴定 永生化肝细胞克隆 SV40LT-pcDNA3.1(-) 重组载体 建立人源性永生化肝细胞系HepLL 人源性永生化肝细胞系构建研究 传代培养 已稳定传 47 代 HepLL具有原代肝细胞相似的生物学特征和功能 呈肝板样生长 超微结构 糖原染色阳性 HepLL在裸鼠脾内移植，表达肝细胞生物特性 脾内细胞移植 细胞呈岛样生长 表达肝细胞特异抗原 内科学（传染病）国家重点学科 传染病诊治国家重点实验室 在建成HepLL基础上，又建立人源性永生化肝细胞系2株（HepLi－2、3）和猪永生化肝细胞系3株（HepLP－1、2、3） HepLL系列肝细胞系已被多家研究机构（上海交大、上海肿瘤研究所等）应用于科学研究 人源性永生化肝细胞系为人工肝研究提供了潜在肝细胞源，并为肝细胞移植和体外药物筛选提供新的细胞模型 内科学（传染病）国家重点学科 传染病诊治国家重点实验室 利用经胶原改性的乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)为构建仿生支架进行原代人肝细胞培养 PLGA支架可明显促进肝细胞的贴壁和增殖 提高肝细胞白蛋白的合成、氨的清除与尿素合成 肝细胞体外组织样培养研究 —Li J, Li L, et al.ASAIO J. 2006; 52 (3): 321-7. 内科学（传染病）国家重点学科 传染病诊治国家重点实验室 肝细胞体外大规模培养、冻存研究 可逆性永生化 肝细胞 评价肝细胞活性和功能 肝细胞形态、超微结构 肝细胞数量 肝细胞的活率、贴壁率 白蛋白合成量 细胞色素P450酶活力（安定转化试验）等 培养参数优化 血清用量 接种的液体量 培养基pH 细胞接种的初始数目等 新型转瓶培养系统 程序降温、液氮储存 内科学（传染病）国家重点学科 传染病诊治国家重点实验室 微囊化肝细胞的大规模培养 AC(海藻酸钠－壳聚糖)微囊包裹HepLL细胞 置于转瓶培养仪匀速旋转培养 Hep LL细胞随着时间延长，集聚成球，逐渐增多增大 微囊化肝细胞制作 微囊化肝细胞转瓶培养 第6天 第10天 第15天 微囊化HepLL细胞核仁明显，富含线粒体、内质网及糖原颗粒，可见紧密连接及毛细胆管样结构 毛细胆管样结构 细胞间紧密连接 B 富含内质网、线粒体 内科学（传染病）国家重点学科 传染病诊治国家重点实验室 生物反应器研究 理想生物反应器 膜或支架材料等具有良好的生物相容性，便于肝细胞黏附、聚集 良好的物质交换效能 易于“放大”，能够容纳至少1010个肝细胞 肝细胞与患者血浆（血液）进行物质交换的场所 生物复合材料已经成为生物反应器研究的热点之一 生物人工肝系统构成示意图 内科学（传染病）国家重点学科 传染病诊治国家重点实验室 微囊化肝细胞悬浮培养反应器体外评价 微囊化肝细胞悬 浮培养反应器 微囊化肝细胞悬浮培养生物反应器：（正在进行体外评价） 生物支架式生物反应器 PLGA支架、PLGA/CS支架正在研究中（浙大高分子材化系合作） 生物支架式反应器 内科学（传染病）国家重点学科 传染病诊治国家重点实验室 生物型人工肝动物实验研究 －国家自然科学基金面上项目（编号资助 建立猪急性肝衰竭动物模型 进行生物型人工肝疗效和安全性评价研究 猪肝组织呈现出血性坏死 急性肝衰竭猪动物模型 肝，X3700 肝，HE，X200 两只猪正在接受BAL治疗 内科学（传染病）国家重点学科 传染病诊治国家重点实验室 生物型人工肝能有效地改善肝衰竭猪肝功能 生物型人工肝延长肝衰竭猪存活时间 急性肝衰竭模型组：48±7h 装置对照组：43±8h 人工肝治疗组：106±23h －Li LJ, et al. Journal of Hepatology, 2006,24:317-324 －Li LJ, et al. International Journal of Artificial Organs, 2003 ,26:507-513 －专利《一种杂合型人工肝装置》（Z5） 受试动物生存曲线 * 与AHF组、Sham BAL组比较，P 0.01 * 与AHF组、Sham BAL组比较，P 0.05 * 与AHF组、Sham BAL组比较，P 0.01 * 与Sham BAL组比较，P 0.05 内科学（传染病）国家重点学科 传染病诊治国家重点实验室 混合型人工肝临床研究 引进中空纤维管式生物反应器 选择中国实验用小型猪为肝细胞供体 治疗15例慢性重型病毒性肝炎患者，11例好转出院 内科学（传染病）国家重点学科 传染病诊治国家重点实验室 重肝患者在接受混合型人工肝治疗 混