第四章 紫外-分光光度法.ppt

1.单色光不纯引起的偏离 朗伯—比耳定律只适用单色光 实际上，入射光并非纯的单色光，而是具有一定波长范围的近似单色光。 由于物质对不同波长光的吸收能力不同，即k不同，得到的吸光度的数值就不同，因此测出的总吸光度与浓度不成正比，数值偏小，产生负误差，导致工作曲线上端向下弯曲。 单色光的纯度愈差，即波长范围愈宽，这种负误差愈大 2.溶液本身的原因引起的偏离 朗伯—比耳定律只适用于均匀、非散射性溶液 被测物以胶体 、乳浊、悬浮状态存在时，测定时入射光除了被吸收之外，还会有因反射、散射作用而造成的损失，使得透射光偏小， 因而测出的吸光度数值要比实际数值要大，导致偏离朗伯—比耳定律，产生正误差。 重铬酸钾 [zhòng gè suān jiǎ]Cr2O72-呈橙色，而CrO42-呈黄色，两者对不同波长光线的吸收性能完全不同。 浓度较高时，质点之间会互相影响对方的电荷分布，吸光性能发生改变，必然导致偏离朗伯-比尔定律 。 ε反映了吸光物质对光的吸收能力，ε值越大，表明有色溶液对光的吸收能力越强，溶液颜色越深，用光度法测定该吸光物质时的灵敏度越高。因此ε是衡量光度分析法灵敏度的重要指标。通常所说的摩尔吸光系数是指最大吸收波长处的摩尔吸光系数,以εmax表示. 百分吸光系数和摩尔吸光系数有如下关系： 用不同波长的单色光照射，测定吸光度。 吸收曲线清楚地描述了物质对光的吸收情况。 在溶液浓度和液层厚度一定的条件下，测定溶液对不同波长单色光的吸光度，以波长λ为横坐标，以吸光度Ａ为纵坐标作图，得到光吸收程度随波长变化的关系曲线称为吸收光谱。 如苯酚比苯的最大吸收波长长，同时强度增大。 氙灯也可当可见光源 光栅的工作原理如图：由光源发出复合光进入狭缝的光，经准直镜变为平行光投射到光栅，光栅使不同波长的光有不同的偏转角度，形成按波长顺序排列的光谱，让特定波长的光进入出光狭缝，从而得到所需波长的单色光。 玻璃材质会吸收紫外光 在测量时如对比色皿有怀疑,可自行检测。用户可将波长选择置实际使用的波长上,将一套比色皿都注入蒸馏水,将其中一只的透射比调至95%（数显仪器调置100%）处,测量其他各只的透射比,凡透射比之差不大于0.5%,即可配套使用。? 使用比色皿时, 还应特别注意通光方向。由于比色皿的两个通光面的材料不均匀, 两个通光面的沾污情况不均匀, 所以不同的通光方向可能会引起光谱特性的变化, 从而影响分析测试时吸光度值的变化, 带来分析误差。一般比色皿的毛玻璃面上都刻有箭头, 或在透光面上蚀刻有标记, 以供使用者辨认通光方向。 配对比色皿时不能设波长小于210nm，因为200-210nm范围内的吸收为末端吸收，不稳定。 * 特点： 使用时来回拉动吸收池，移动误差； 对光源要求高，光源要稳定； 吸收池配对 因为在λmax处，灵敏度和准确度最高 狭缝的宽度会直接影响到测定的灵敏度和校准曲线的线性范围。狭缝宽度过大时，入射光的单色性降低，校准曲线偏离比耳定律，灵敏度降低；狭缝宽度过窄时，光强变弱，势必要提高仪器的增益，随之而来的是仪器噪声增大，于测量不利。选择狭缝宽度的方法是：测量吸光度随狭缝宽度的变化。狭缝的宽度在一个范围内，吸光度是不变的，当狭缝宽度大到某一程度时，吸光度开始减小。因此，在不减小吸光度时的最大狭缝宽度，即是所欲选取的合适的狭缝宽度。 如果待测组分本身没有颜色或本身颜色很浅，那么就无法直接进行测定，需利用显色反应将待测组分转变为有色物质，然后进行测定。 例如：Fe2+本身颜色很弱。如加入显色剂邻二氮菲，则生成稳定橙红色络合物，该络合物吸光能力强，用于含量测定效果佳。 最适宜显色剂浓度及用量可通过实验确定。 显色剂一般本身为弱酸或弱碱，溶液的pH值可显著影响显色剂的解离程度和显色反应的完成程度。可通过实验确定最合适pH。 显色反应一般需要一定时间，显色程度会随着时间变化而变化。可作显色反应时间-吸光度曲线，最合适的时间为曲线中的平坦部分 紫外-可见分光光度法需要参比溶液作空白以消除吸收池壁、溶剂对入射光的反射和吸收所带来的误差及其他一些干扰因素所带来的影响。 许多化工产品、药品都有紫外-可见吸收，同时，紫外-可见分光光度法具有灵敏度高、准确度高、选择性好、操作简单等特点，因此紫外-可见吸收分光光度法在多个领域得到了广泛应用。 缺点：要求待测样品的吸光系数已知或可查，测定条件不可能与资料完全一致，存在误差。 缺点：只有在测定的浓度区间内溶液完全遵守朗伯-比尔定律，并且Cs和Cx很接近时，才能得到较为准确的结果 配制一系列浓度不同的标准溶液，分别测量它们的吸光度，将吸光度与对应浓度作图。在一定浓度范围内，可得一条直线，称为标准曲线或工作曲线。然后，在相同的条件下