分子生物学的笔记2.docVIP

DNA的复制一、DNA复制的方式及一般过程：(一) DNA的半保留复制(semiconservative replication)和Crick在提出DNA双螺旋结构模型时即推测，DNA在复制时首先两条链之间的氢键断裂两条链分开，然后以每一条链分别做模板各自合成一条新的DNA链，这样新合成的子代DNA分子中一条链来自亲代DNA，另一条链是新合成的，这种复制方式称为半保留复制。（二）DNA复制的一般过程：DNA双螺旋是由两条方向相反的单链组成，复制开始时，双链打开，形成一个复制叉或复制泡，两条单链分别做模板，各自合成一条新的DNA链。由于DNA一条链的走向是5′→3′方向，另一条链的走向是3′→5′方向，但生物体内DNA聚合酶只能催化DNA从5′→3′的方向合成。在以3′→5′方向的母链为模板时，复制合成出一条5′→3′方向的前导链(leadingstrand)，前导链的前进方向与复制叉打开方向是一致的，因此前导链的合成是连续进行的。而另一条母链DNA是5′→3′方向，它作为模板时，复制合成许多条5′→3′方向的短链，叫做随从链(lagging strand)，随从链的前进方向是与复制叉的打开方向相反的。随从链只能先以片段的形式合成，这些片段就叫做岗崎片段(Okazaki fragments)，原核生物岗崎片段含有1000-2000核苷酸，真核生物一般10000核苷酸。最后再将多个岗崎片段连接成一条完整的链。由于前导链的合成是连续进行的，而随从链的合成是不连续进行的，所以从总体上看DNA的复制是半不连续复制(图3-7)。二、DNA复制过程的三个阶段第一个阶段为DNA复制的起始阶段，这个阶段包括起始点，复制方向以及引发体的形成。第二阶段为DNA链的延长，包括前导链及随从链的形成和切除RNA引物后填补空缺及连接岗崎片段。第三阶段为DNA复制的终止阶段。（一）DNA复制的起始阶段：复制是从DNA分子上的特定部位开始的，这一部位叫做复制起始点(originof replication)常用ori或o表示。细胞中的DNA复制一经开始就会连续复制下去，直至完成细胞中全部基因组DNA的复制。DNA复制从起始点开始直到终点为止，每个这样的DNA单位称为复制子或复制单元(replicon)。在原核细胞中只有一个复制起始点，即有一个复制子。在真核生物中复制是从许多起始点同时开始的，即有许多个复制子。1、DNA复制起始点的结构特性：大肠杆菌复制起始点Ori由422个核苷酸组成，是一系列对称排列的反向重复序列，即回文结构(palindrome)。有些生物复制起始点Ori是富含A?T的区段。这些特殊的结构对于在DNA复制起始过程中参与的酶和许多蛋白质分子的识别和结合都是必须的。2、DNA复制的方向性：(1)定点开始双向复制； (2)定点开始单向复制 (3)两点开始单向复制。3、DNA复制的起始：DNA双螺旋的解旋由多种酶来完成的。DNA解链酶：能通过水解ATP获得能量来解开双链DNA。单链结合蛋白（SSB蛋白）：能保证解开的双链保持单链结构，但不起解链作用。RNA聚合酶：合成RNA引物，再由DNA聚合酶合成新的DNA链。（二）DNA链的延长DNA的复制实际上就是以DNA为模板在DNA聚合酶作用下，将游离的四种脱氧单核苷酸(dATP,dGTP,dCTP,dTTP,简写为dNTP)聚合成DNA的过程这是一个非常复杂的酶促反应，需要许多种酶和蛋白质参与，现分别叙述它们在DNA复制中的作用。1、DNA聚合酶：实验证明大肠杆菌中DNA复制的主要过程靠DNA polⅢ起作用，而DNA polⅠ和DNA polⅡ在DNA错配的校正和修复中起作用。DNA聚合酶的共同性质：①需要DNA模板；②需要RNA做为引物；③催化dNTP加到引物的3′-OH末端，因而DNA合成的方向是5′→3′；④三种DNA聚合酶都属于多功能酶，它们在DNA复制和修复过程的不同阶段发挥作用。DNA聚合酶Ⅰ和II主要起到修复DNA和复制的准确性中发挥作用；DNA聚合酶III是DNA复制链延长反应中的主导聚合酶。真核生物DNA聚合酶：真核生物DNA聚合酶有α、β、γ、δ及ε。复制中起主要作用的是DNA polα。DNA polβ与DNA修复有关。DNA polγ在线粒体DNA的复制中起作用。DNA polδ前导链的合成靠DNA polδ催化，并且还需要一种细胞周期调节因子（proliferating cell nucleus antigen, PCNA)参与而随从链的合成靠DNA polα和引发酶配合作用完成。2、与超螺旋松驰有关的酶：拓扑异构酶(topoisomerase)是一类改变DNA拓扑性质的酶。在体外可催化DNA的各种拓扑异构化反应，而在生物体内它们可能参与了DN