HPLC测定小儿清咽颗粒中靛蓝和靛玉红含量.docVIP

HPLC测定小儿清咽颗粒中靛蓝和靛玉红含量 　　摘 要 目的 采用高效液相色谱法（HPLC）分析小儿清咽颗粒中有效成分靛蓝和靛玉红的含量。方法 以Agilent HC-C18（250 mm×4.6 mm，5 mm）色谱柱，以乙腈-0.1%醋酸溶液（78：22）作为流动相，流速为1.0 mL/min，柱温：30℃；检测波长：292 nm。结果 靛蓝和靛玉红分别在0.009～0.180mg/mL和0.64～12.80mg/mL范围内有良好的线性关系，平均加样回收率（n=6）分别为98.3%、97.2%，RSD（n=6）分别为1.26%、0.83%。结论 本方法准确，简便，重复性好，可用于小儿清咽颗粒中靛蓝和靛玉红的定量分析。 　　关键词 小儿清咽颗粒 靛蓝 靛玉红 高效液相色谱法 　　小儿清咽颗粒为青黛、玄参、蒲公英、牛蒡子、薄荷、板蓝根、连翘、牡丹皮九味药材经水煎煮法加工制成。具有清热解表、解毒利咽的功效，用于小儿外感风热引起的发热头痛，咳嗽音哑，咽喉肿痛。小儿清咽颗粒标准为部颁标准，标准号：WS4-B-1092-92。该标准中没有收载含量测定项。对质量标准的评价仍停留在定性水平，对产品质量的控制存在一定的局限性。青黛为十字花科植物菘蓝、爵床科植物马蓝或蓼科植物蓼蓝的叶经加工制成的干燥粉末。具有清热解毒、凉血等功效，主要用于口疮痄腮、温毒发斑、血热咳血等症[1，2]。靛蓝（Indigo）、靛玉红（Indirubin）为青黛中主要的活性成分和含量较高的成分[3]。现代药理研究表明靛蓝、靛玉红的体外抗菌范围广、对细菌、病毒、钩端螺旋体、真菌等多种病原微生物有抑制作用，且抗病毒作用显著。临床广泛用于上呼吸道感染、扁桃体炎、咽炎及急性传染性肝炎等病症[4]。靛蓝和靛玉红的含量测定方法有氧化滴定法、直接比色测定法、薄层色谱扫描法、紫外分光光度法以及高效液相色谱法[5]。前两种方法操作误差较大，薄层扫描法受点样误差、影响样品展开后斑点颜色随时间有所变化，特别是喷以显色剂后其颜色随时间变化更大；紫外分光光度法适合于杂质成分干扰少的供试品溶液的测定。有学者比较此几种方法测定靛蓝和靛玉红的含量，结果显示高效液相色谱法具有稳定性好、精密度高和加标回收率高等优点。本文采用反相高效液相色谱法对小儿清咽颗粒中靛蓝和靛玉红的含量进行了测定。 　　1 仪器与试剂 　　LC-20A液相色谱仪（Chemeleon色谱工作站，DAD二极管阵列检测器，岛津公司）；AEU-210型电子天平（d=0.1 mg，日本岛津）；SK5300H超声波清洗机（上海超声仪器有限公司）。靛蓝、靛玉红对照品（供含量测定用，中国药品生物检定所，批号为：110716-200509，110717-200204），乙腈（色谱纯，美国Fisher公司）；小儿清咽颗粒（北京长城制药厂，批准文号：国药准字；阴性空白制剂自制；水为双蒸水；其他试剂均为分析纯。 　　2 方法 　　2.1 对照品溶液的制备 　　取经五氧化二磷减压干燥器中干燥至恒重的靛蓝及靛玉红对照品适量，精密称定，加甲醇-1%醋酸（50：50）分别制成每1 mL含0.35mg的溶液和25.6mg的溶液。分别精密吸取上述两种对照品溶液各5mL置10mL量瓶中，以甲醇-1%醋酸（50：50）定容至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液（靛蓝0.18mg/mL，靛玉红12.8mg/mL）。 　　2.2 供试品溶液的制备 　　取本品，研细，称取约1.0g，精密称定，置25mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-1%醋酸（50：50）20mL，称定重量，静置1h，超声处理（功率250W，频率50kHz）30min，放冷，再称定重量，用甲醇-1%醋酸（50：50）补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。另取不含青黛的阴性空白制剂，同法制成阴性空白对照溶液。 　　2.3 色谱条件[6～10] 　　色谱柱：Agilent HC-C18（250 mm×4.6 mm，5 mm）；流动相：乙腈-0.1%醋酸（78∶22）；检测波长：292 nm；灵敏度：0.1AUFS；流速：1.0 mL/min；柱温：30℃。 　　2.4 线性关系考察 　　精密吸取混合对照品溶液0.5，1.0，2.0，5.0，10.0mL置10.0mL容量瓶中，以甲醇定容至刻度，摇匀，得到浓度分别为0.009，0.018，0.035，0.09，0.18mg/mL的靛蓝对照品溶液和浓度分别为0.64，1.28，2.56，6.40，12.80mg/mL的靛玉红对照品溶液。精密吸取10 mL注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以浓度（X）对峰面积（Y）进行线性回归，分别绘制标准曲线。 　　2.5 精密度试验 　　取混合对照品溶液10 mL，按上述色谱