黄酒中氨基酸定方法 行业标准.docVIP

目 次 前言 II 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 原理 1 4 试剂 1 5 仪器和材料 1 6 分析步骤 2 7 结果计算 3 8 重复性 3 附录A 4 附录B 5 前 言 本标准由全国食品发酵标准化中心提出并归口。 本标准负责起草单位： 本标准主要起草人： 黄酒中氨基酸的测定方法 范围 本标准规定了黄酒中天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、丝氨酸(Ser)、甘氨酸(Gly)、组氨酸(His)、精氨酸(Arg)、苏氨酸(Thr)、4-氨基丁酸（Aba）、丙氨酸(Ala)、脯氨酸(Pro)、酪氨酸(Tyr)、缬氨酸(Va1)、蛋氨酸(Met)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、苯丙氨酸(Phe)、色氨酸（Trp）、赖氨酸(Lys)共18种氨基酸的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于黄酒中天冬氨酸(Asp)、赖氨酸(Lys)等18种氨基酸的测定，检出限为3.0mg/L。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规则和实验方法 采用异硫氰酸苯酯氨基酸进行衍生，在紫外吸收，C18色谱柱分离后，紫外检测器检测，外标法定量分析。 试剂 乙腈: 色谱纯。 甲醇：色谱纯。 异硫氰酸苯酯 (≥99%)。 异硫氰酸苯酯溶液：移取0.12 mL异硫氰酸苯酯(4.3)至10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度。 三乙胺：分析纯。 三乙胺溶液：移取1.40 mL三乙胺(4.5)至10 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度。 钠：分析纯。 正己烷：分析纯。 冰乙酸（99.0%）。 乙酸溶液：取1mL冰乙酸(4.9) 用高纯水稀释到10mL。 浓盐酸:分析纯。 0.1 mol/L盐酸溶液：取0.90mL浓盐酸,用水定容至100mL。 氨基酸标准物质纯度≥98%。 标准储备液：准确称取各氨基酸标准品0.1000g（精确至0.1mg）用0.1 moL/L盐酸（4.12）溶解后定容至10mL混匀，使其浓度为1.0mg/mL储存在-20℃下有效期为1年。 标准工作液准确量取标准储备液（4.14），用水稀释，依次配制成10μg/mL，20μg/mL，40μg/mL，60μg/mLμg/mL的标准溶液，现配现用。 水：GB/T 6682 二级水。 仪器和材料 高效液相色谱带有紫外检测器或二极管阵列检测器。 分析天平（精度0.1mg）。 漩涡混合器。 2ml塑料离心管。 微孔有机滤膜：孔径0.45 μm。 分析步骤 样品 取黄酒样品1.0 mL，用水定容至10 ml容量瓶中混匀，取200 μL稀释后的酒样，置于2mL 离心管中,再加入异硫氰酸苯酯溶液(4.4)100 μL、三乙胺溶液( 4.6 ) 100 μL混匀室温下放置1 h后，加入30 μL乙酸（.10）。 萃取净化 在离心管中加入400 μL正己烷（4.8）,漩涡混合器振荡1 min静置10 min，用注射器吸取下层溶液,经0.45 μm有机滤膜过滤，滤液测定。μL系列标准工作液（4.15）。置于2mL 离心管中,加入异硫氰酸苯酯溶液(4.4)100 μL、三乙胺溶液( 4.6 ) 100 μL混匀室温下放置1 h后，加入30 μL乙酸（.10）色谱柱：C18色谱柱250 mm×4.6 mm, 5 μm）。 流动相及洗脱程序见表1时间0.02mol/L乙酸钠(含0.5‰三乙胺,pH=6.20 ) 乙腈/ % 水/ % 起始 5 5 3 90 5 5 12 85 10 5 25 81 10 9 26 76.5 18.5 5 30 65 28 7 40 60 32 8 45 0 80 20 53 0 80 20 54 0 10 90 59 0 10 90 60 90 5 5 70 90 5 5 流速：1min。 进样：10μL柱温：38℃检测波长：254nm标准工作液样品中各组分的含量按式（1）计算获得：样品中各组分的含量按下式计算………………………………………………（1） 式中： X样品中各组分的含量，单位为（mg/L）C—从标准曲线求得样品中组分的含量，单位为（mg/L）F—样品稀释倍数为10； 平行测定结果用算术平均值表示，保留2位有效数字。 重复性 在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的相对偏差不大于10%。 （资料性附录）18种氨基酸的分子式和相对分子量 18种氨基酸的分子式和相对分子量见表A.1。 表A.1 18种氨基酸的分子式和相对分子量 名 称 英文名称 分子式 相对分子量 天冬氨酸 Aspartic acid C4H7O4N 133.10 谷