抗原与抗原工程.pptVIP

Model of the peptide splicing reaction 目的基因(编码抗原)获得 表达载体(质粒、等)? 重组DNA的构建 表达宿主 表达 ? 纯化 ? 基因工程抗原。 亲水性( hydrophilicity)分析：Kyte-Doolittle方案 主链柔性(flexibility)分析：Karplus-Schultz方案 溶液可及性(accessibility)分析：Emini方案 抗原性(antigenicity)分析：Jameson-Wolf方案 预测软件DNA Star Protean; Biosun GoldKey; 二级结构预测：PHD、SOPMA 预测服务器 结合基序(Binding Motifs) PEPTOOL Peptool也能预测B细胞表位 距阵(Matrices) Parker: BIMAS Rammensee: SYFPEITHI Huang: CMDB 神经网络(Neural Networks) 支持向量机(Support Vector Machines) 隐马科夫模型(Hidden Markov Models) 优缺点 优点：能较准确地预测未知肽与MHC分子间的亲和力，敏感性高； 缺点：特异性较低；目前预测的表位多是基于MHC分子与抗原肽间的相互关系，尚未考虑TCR的识别，因此筛选的结果很多不是抗原肽； 改进思路：考虑TCR的作用 组合肽库技术： 用RMAS 或T2 等抗原递呈缺陷细胞作靶细胞负载特定长度的随机多肽， 然后在体外通过检测它们刺激T细胞活化的效应， 筛选未知肿瘤抗原的T细胞表位 此法可得到在功能上类似或超过天然表位肽的功能模拟肽(Functional Mimic)，又称模拟表位(Mimotope) 用酸性液体将抗原肽从MHC分子洗脱下来； 随后用高效液相色谱分离纯化得到若干种多肽； 再分别对这些多肽进行验证分析， 筛选出合适的抗原多肽。 1. 试述抗原的基本特性。 2. 试述决定抗原特异性的结构基础。 3. 试比较TD-Ag和TI-Ag的特点。 4. 简述影响抗原免疫应答的主要因素。 5. 试述超抗原与普通抗原的异同点。 6 . 噬菌体展示技术的基本原理及其在抗原工程中的应用。 7 . SEREX技术的基本原理及其在抗原工程中的应用。 佐剂 丝裂原 超抗原 非特异性免疫刺激剂 普通蛋白质抗原可激活机体总T细胞库中万分之一至百万分之一的T细胞。 某些抗原物质，只需要极低浓度(1~10ng/ml)即可激活2％~20％T细胞克隆，产生极强的免疫应答，这类抗原称之为超抗原 (super-antigen, SAg)。 超抗原 SAg的作用特点： 非特异性免疫刺激剂 具有强激活T细胞(CD4+T细胞)作用可刺激T细 胞总数的5～20%； 不需APC处理，直接与MHC-II类分子和TCR-V? 结合； 不受MHC限制，同MHC-II类分子结合，增加TCR与SAg的亲和力； 可激活T细胞，又可致T细胞产生免疫耐受或抑制。 佐剂 非特异性免疫刺激剂 预先或与抗原同时注入体内，可增强机体对该抗原的免疫应答或改变免疫应答类型的非特异性免疫增强性物质，称为佐剂(adjuvant) 生物性：卡介苗(BCG)、短小棒状杆菌(CP)、脂多糖(LPS)和细胞因子 (如GM-CSF); 无机化合物：氢氧化铝[Al(OH)3]； 人工合成：双链多聚肌苷酸：胞苷酸(poly I:C)和双链多聚腺苷酸：尿苷酸(poly A:U)；矿物油；脂质体；免疫刺激复合物(ISCOMs) ；含CpG脱氧寡核苷酸 等。 弗氏完全佐剂(Freunds complete adjuvant, FCA) 弗氏不完全佐剂(Freunds incomplete adjuvant, FIA) 是目前动物试验中最常用的佐剂。 佐剂 非特异性免疫刺激剂 改变抗原物理性状，延缓抗原降解和排除，延长抗原在体内潴留时间； 刺激单核－巨噬细胞系统，增强其对抗原的处理和提呈能力； 刺激淋巴细胞的增殖分化，从而增强和扩大免疫应答的能力。 因可致细胞发生有丝分裂而得名。 由于其与淋巴细胞表面的相应配体结合，刺激静止淋巴细胞转化为淋巴母细胞和有丝分裂，激活某一类淋巴细胞的全部克隆，因而被认为是一种非特异性的淋巴细胞多克隆激活剂。 小鼠 — — + + + T细胞 — — + SPA (葡萄球菌蛋白A) + — — LPS (脂多糖) — + + PWM (美洲商陆) — + — PHA (植物血凝素) — + — Con A(刀豆蛋白A) B细胞 T细胞 B细胞 人