大学生科创基金申请书 野生大豆SNARE转运蛋白基因启动子克隆及表达.pptVIP

野生大豆SNARE 转运蛋白基因启动子克隆及表达特性研究 一、目的意义、国内外研究概况、主要创新之处 二、主要研究内容、目标与技术经济指标 三、研究方法与技术路线 四、前期研究基础、实验条件 五、经费预算 六、年度研究计划及预期进展 七、主要项目组成员介绍 一、项目研究的目的意义、国内外研究概况、主要创新之处 1．研究的目的意义 作物在生长发育的整个时期都会不同程度的受到多种逆境胁迫的危害，由此造成作物严重减产，这已经成为世界性的问题。近年来，随着分子生物学的飞速发展和基因工程技术的日趋成熟，通过基因工程手段改良作物的耐盐碱能力已成为提高作物产量的一种高效的途径。 在真核生物细胞中，各细胞器间物质和信息的交流是细胞生命活动的基本保证，而囊泡转运是细胞器之间物质和信息交流的主要方式。植物的SNAREs (Soluble N-ethyl-maleimide-sensitive fusion protein attachment protein receptors) 是一个多功能的蛋白家族，介导大多数的囊泡转运，在植物的许多生理过程，尤其植物对非生物胁迫的响应中发挥着重要的作用。 关于SNAREs 本研究以模式植物拟南芥为试材，通过GsSNARE基因启动子驱动GUS基因的表达，在转基因拟南芥中研究GsSNARE基因在不同组织中的表达特性、在植株不同发育时期的表达特性、及在盐、ABA胁迫处理下的表达特性。该研究通过对GsSNARE基因表达特性的研究，指导下一步GsSNARE基因在植物逆境胁迫下的功能分析及抗非生物胁迫机制研究，并且为转基因育种提供重要的基因资源。 思路 2．国内外研究概况 2.1 SNARE转运蛋白基因研究进展 2.1.1植物SNARE蛋白的分类 2.1.2植物SNARE核心复合体的结构 2.1.3 SNARE蛋白参与植物非生物胁迫反应 2.2 基因表达分析的研究进展 2.2.1基因表达分析的内容 2.2.2 基因表达分析的内容  2.1 SNARE转运蛋白基因研究进展 2.1.1植物SNARE蛋白的分类 植物细胞囊泡运输过程中的膜融合主要是由SNARE蛋白介导的，通过比较了人和酵母的多个SNARE蛋白序列， 发现不同SNARE蛋白尽管在氨基酸长度和结构上有所区别, 但有一段序列(长度为55个氨基酸)是高度保守的，称之为“SNARE结构域(SNARE-domain)”，是SNARE核心复合体(core complex)形成时各个成分相互作用的部位。根据位于SNARE结构域中间的氨基酸残基是精氨酸，还是谷氨酰胺，将SNAREs家族成员分为R-SNAREs和Q-SNAREs两类。 2.1.2植物SNARE核心复合体的结构 囊泡膜与靶目标膜融合时，会形成SNARE核心复合体 (称为SNARE pin或SNARE core complex)，它是由Q-SNAREs和R-SNAREs 的4个SNARE 结构域结合在一起形成的四螺旋束构成。SNARE核心复合体的SNARE蛋白通常包括1个突触融合蛋白(Syntaxin，含有Qa-SNARE结构域)、1个SNAP25类蛋白(含有Qb-和Qc-SNARE结构域)和1个VAMPs(含有R-SNARE 结构域)。 2.1.3 SNARE蛋白参与植物非生物胁迫反应 NPSN是植物特有的SNAREs成员，它在植物应对各种非生物胁迫的过程中扮演着重要的角色。进一步地分析证明，野生型植株在受到盐胁迫时，含有 H2O2 的囊泡与液泡的融合会对植物造成毒害。另有研究证明，囊泡运输的调节基因也参与了植物对非生物胁迫的响应。囊泡融合在植物抵御非生物胁迫中的分子机制还有待于进一步的研究，与之相关的 SNAREs 家族其他成员的鉴定将为此机理的揭示提供强有力的论据。 2.2 基因表达分析的研究进展 2.2.1基因表达分析的内容 分析基因的表达特性，对阐明基因的功能和作用机制具有指导性的意义。对于基因表达情况的分析，主要包括基因的表达模式分析、发育阶段依赖性分析、组织定位分析、亚细胞定位分析等。 基因的表达模式分析指基因在特定的处理条件下的表达变化趋势，可一定程度上揭示该基因与处理条件之间的关系。 发育阶段依赖性分析即指在植物发育的不同阶段基因的表达情况，反映了基因与植物发育相关的信息。 组织定位分析即基因在植物不同组织中的表达情况分析。 亚细胞定位分析是指某种蛋白或表达产物在细胞内的具体存在部位，如仅在核内存在，还是胞质内存在，还是细胞膜上存在。 2.2.2 基因表达分析的内容 随着生物技术的发展，可通过不同的手段研究基因的表达情况，如通过半定量RT-PCR和Real-time PCR研究基因的表达情况，通过GFP融合蛋白技术研究基因的