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一株产微生物絮凝剂菌株培养条件优化 　　摘要：近年来国内外微生物絮凝剂的研制开发已经成为热点，本实验对微生物絮凝剂产生菌种筛选、培养条件等进行较为系统地研究与探讨。以活性污泥作为菌种来源，高岭土悬液为絮凝对象，在特定筛选培养基中进行菌种培养增殖，从中筛选出具有絮凝活性菌种，记为J3。在原特定的培养基基础上，对培养基的组成和培养条件进行优化，进行了正交实验设计[1,2,3]，选择影响微生物絮凝剂发酵培养基的碳氮源(Ⅰ)、培养温度(Ⅱ)、pH值(Ⅲ)和通气量(Ⅳ)等4因素4个水平进行试验，得到了J3菌最佳培养条件。 　　关键词：絮凝，微生物，微生物絮凝剂，正交试验 　　 中图分类号：Q93 文献标识码：A 　　影响微生物絮凝剂发酵培养基的培养条件有培养基的组成，培养温度、pH值和通气量，在进行微生物絮凝剂发酵培养基及培养条件的优化试验时，共需44＝256次试验，本实验选用了正交实验方法进行优化。 　　1. 材料与方法 　　1.1 菌种的采集 　　望塘污水处理厂活性污泥、合肥钢铁厂活性污泥 　　1.2 所需仪器 　　QHZ-98A全温度振荡培养箱、TDL-5离心机、高温灭菌锅、DHP-9082恒温培养箱、721分光光度计、760Crt紫外分光光度计、JJ-4A六联电动搅拌器、XSP-16A倒置显微镜、GDS-3B光电式浊度仪、PHS-25pH计 　　 　　1.3 所需的药剂、材料 　　4‰高岭土悬浊液； 　　1#牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g、蒸馏水1000mL、pH=7.5； 　　2# 可溶性淀粉20g、硝酸钠1g、磷酸二氢钾0.5g、七水硫酸镁0.5g、蒸馏水1000mL、pH=7.0； 　　3#蔗糖40g 、硝酸钠0.5g、磷酸二氢钾0.5g、七水硫酸镁0. 25g、酵母汁2g、蒸馏水1000mL、pH=7.5。 　　1.4 絮凝活性的测定[ 4] 　　取经72h发酵的1.0mL培养液，加入20mL的4g/L悬浊液中，六联电动搅拌器100r/min搅拌10min后，721型分光光度计550nm处测定上层清液B，以不加发酵液的上层清液A为对照，通过浊度的减少来确定絮凝程度，以絮凝率定量表示絮凝活性。 　　絮凝率(%)＝（A－B）/A×100 　　A—对照上清液550nm处的光密度值； 　　B—样品上清液550nm处的光密度值。 　　1.5高效絮凝菌培养条件优化 　　1.5.1不同碳源、氮源对絮凝菌生长及絮凝活性的影响 　　微生物营养中有碳源、氮源、生长因子、无机盐和水等要素。各种微生物对营养的要求不同，暂时还没找到能够满足各种微生物生长的培养基。在配制培养基时需要针对微生物的不同类型，满足特定的生长条件，并根据不同的培养目的，选择适宜的培养基。试验中选取其中效果较好的J3菌作为目标菌。 　　1.5.2培养基的优化 　　在1.5.1实验阶段，分别筛选出效果比较好的碳氮源各两种，在进行微生物絮凝剂发酵培养基的优化试验，影响微生物絮凝剂发酵培养基的培养条件有培养基的组成、培养温度、pH值和通气量。 　　1.5.3影响因素和水平的确定 　　本次试验，选择影响微生物絮凝剂发酵培养基的碳氮源(Ⅰ)、培养温度(Ⅱ)、pH值(Ⅲ)和通气量(Ⅳ)等4因素4个水平进行试验，以絮凝剂的絮凝率为控制质量指标,其中碳氮源(Ⅰ)分为：葡萄糖－尿素，葡萄糖－酵母膏，蔗糖－尿素，蔗糖－酵母膏。 　　表1 正交实验的影响因素和水平 　　Table1Effect factor and level of experiment cross 　　水平号 影响因素 　　 碳氮源（g/L） 培养温度（℃） pH 通气量（r/min） 　　1 葡－尿 20 6 125 　　2 葡－酵 30 7 150 　　3 蔗－尿 35 8 175 　　4 蔗－酵 40 9 200 　　1.5.4正交实验设计 　　正交试验的优化设计是利用事先设计好的正交表来合理安排试验。 　　2. 结果与分析 　　2.1不同碳源、氮源对絮凝菌生长及絮凝活性的影响 　　实验结果表明，J3菌在各种所试在各种所试碳源中以蔗糖和葡萄糖为最佳；氮源中以尿素和酵母汁为最佳。 　　2.2正交实验结果 　　表2 正交试验结果 　　Table2Result of expriment cross 　　编号 因素及水平（mg/L） 絮凝率（％） 　　 碳氮源(mg/L) 培养温度(℃) pH 通气量(r/min) 　　1 葡－尿 20 6 125 69.51 　　2 葡－尿 30 7 150 75.48 　　3 葡－尿 35 8 175 72.64 　　4 葡－尿 40 9 200 58.15 　　5 葡－酵 20 7