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实验七 果蝇唾腺染色体标本的制备和观察 一、实验目的 1. 练习分离果蝇幼虫唾腺的技术，学习唾腺染色体的制片方法 2. 观察了解果蝇唾腺染色体的形态学及遗传学特征 二、实验原理 果蝇是双翅目昆虫，幼虫期具有很大的唾腺细胞，其中的染色体是巨大的唾液腺染色体。 唾液腺染色体经体联会不断地进行自我复制而不分开，经过许多次的复制形成约1000～4000拷贝的染色体丝，合起来达5mm宽，400mm长，比普通中期相染色体大得多（约100～150倍），所以又称为多线染色体。 唾液腺染色体具有许多重要特征，为遗传学研究的许多方面，如染色体结构、化学组成、基因差别表达等提供了独特的研究材料。 二、实验原理 二、实验原理 普通果蝇（2n=2x=8）唾腺染色体的特点表现在：各染色体着丝点附近异染色质区相互结合形成染色很深的染色中心，第Ⅱ、Ⅲ对染色体呈Ｖ形（中着丝粒），各有两臂，Ｘ染色体呈棒状，第Ⅳ对染色体呈粒状，观察时可见五条臂由染色中心向外蜿蜒伸展。 二、实验原理 染色中心： 着丝粒相聚 横纹结构： 染色质凝缩 染色粒DNA深染 染色粒间DNA浅染 种的特异性：横纹的宽窄、疏密、顺序、数目 三、实验材料与器具 D.virilis果蝇三龄幼虫 0.7%生理盐水 1N 盐酸 改良苯酚品红染色液 双筒解剖镜 显微镜 解剖针 吸水纸 载玻片和盖玻片 四、实验步骤 四、实验步骤 四、实验步骤 四、实验步骤 四、实验步骤 四、实验步骤 五、注意事项 1. 一定加生理盐水，否则唾腺易干。 2. 将脂肪组织清除干净 3. 水不可太多，否则幼虫会漂浮而且活跃 4. 染色时间不可过长，否则背景也着色 5. 压片时要揉，用力要均匀 6. 染色完以后，将旧的染色液吸去，加新的染色液，再压片 7. 吸水时勿将唾腺一起吸走 上周实验结果统计(2008级） 上周实验结果统计(2007级） 本次实验内容 1、弃去正反交F2培养瓶中的F1成蝇，分别置于25℃继续培养； 2、每组接种脉孢菌野生型和缺陷型各一支； 3、每人制作一张合格的果蝇唾腺染色体临时压片一张。 * * 果蝇的唾腺染色体 果蝇的唾腺染色体 1．培养果蝇三龄幼虫 将果蝇放在营养丰富的培养基中，15℃～18℃下饲养，幼虫要生长肥大，才能获得较大的唾腺。 2、剥离唾腺 在一干净的载玻片上滴一滴生理盐水，选择行动迟缓、肥大、爬在瓶壁上即将化蛹的三龄幼虫，或者选择经低温处理的果蝇三龄幼虫置于载玻片上。 每只手各持一个解剖针，在解剖镜下进行操作。果蝇的唾腺位于幼虫体前1/3-1/4处，左手持解剖针按压住虫体后端三分之一的部位，固定幼虫，右手持解剖针扎住幼虫头部口器部位，适当用力向右拉唾腺腺体随之而出。 唾液腺 解剖针 解剖针 唾腺是一对透明的棒状腺体，外有白色的脂肪组织（不透明）。去除幼虫其它组织部分，并把唾腺周围的白色脂肪剥离干净。 3、解离： 吸去生理盐水，滴加1滴1N盐酸处理剥离好的唾液腺5－10 min,使组织疏松，以便压片时细胞分散，染色体展开。 4、染色： 用吸水纸吸去盐酸，滴加改良苯酚品红染色液，染色10-15min 5、压片： 染色完成后，盖上干净的盖片，并覆一层滤纸。将片子放在实验台上，用大拇指均匀用力压片。（注意不要使盖片移动。） 6、镜检 在显微镜下检查你制作的制片，寻找形态良好、分散适中的图象仔细观察各条臂的特点。 155 无 199 44 有 酒窝 89 单 199 110 双 眼皮 100 左上 199 99 右上 双手嵌合 150 短 200 50 长 食指 89 曲 198 109 直 拇指 116 无 199 88 有 美人尖 66 不能 199 133 能 卷舌 112 无 199 87 有 耳垂 49 O 17 AB 63 B 194 65 A 212 无 260 48 有 酒窝 124 单 255 131 双 眼皮 115 左上 259 144 右上 双手嵌合 183 短 257 74 长 食指 97 曲 263 166 直 拇指 163 无 263 100 有 美人尖 98 不能 263 165 能 卷舌 147 无 263 116 有 耳垂 60 O 18 AB 66 B 200 56 A