第十三章-1-生化药物制造工艺1..ppt

生化药物制造工艺 目前绝大部分氨基酸皆可通过发酵法生产，其缺点是产物浓度低，设备投资大，工艺管理要求严格，生产周期长，成本高。 现以L-赖氨酸直接发酵法为例，说明发酵法的基本过程。 2、酶拆分法制备L-苯丙氨酸 （1）L-苯丙氨酸（L-phenylalanine，L-phe）的结构与性质 L-phe，存在于所有蛋白质中，为人体必需氨基酸之一，其分子式为C9H11NO2，分子量为165.19，结构为： L-Phe自水中结晶成白色叶片状晶体，无臭，微苦，pI为5.48；分解点为283～284℃。在25℃水中溶解度为2.96，在75℃水中为6.62，微溶于甲醇及乙醇，不溶于乙醚。1%水溶液pH为5.4～6.0。〔α〕25D为-4.47°（C＝0.5～2.0，在5mol／L HCl中），〔α〕25D为-34.5°（C＝0.5~2.0，在水中）。 三、酶转化法 ? （一）基本原理及过程 酶转化法亦称为酶工程技术，实际上是在特定酶的作用下使某些化合物转化成相应氨基酸的技术。 酶工程法与直接发酵法生产氨基酸之反应本质相同，皆属酶转化反应，但前者为单酶或多酶的高密度转化，而后者为多酶低密度转化。 酶工程技术工艺简单，产物浓度高，转化率及生产效率较高，副产物少。 固定化酶或细胞可进行连续操作，节省能源和劳务，并可长期反复使用。 （二）酶转化法生产的氨基酸品种及工艺 目前医药工业中，用酶工程法生产的氨基酸已有十多种。 DL-缬氨酸、DL-苯丙氨酸、DL-色氨酸、DL-丙氨酸及DL-苏氨酸等分别经氨基酰化酶拆分获得了相应的L-氨基酸，并已投入了工业化生产。 L-天冬氨酸及L-丙氨酸的制备 ?（1）L-天冬氨酸及L-丙氨酸的结构与性质 ①L－天冬氨酸（L-Aspartic acid，Asp）的结构与性质 L-Asp存在于所有蛋白质分子中，含两个羧基和一个氨基，为酸性氨基酸，分子式为C4H7NO4，分子量为133.10，结构式为： L-Asp的化学名称为α-氨基丁二酸或氨基琥珀酸，纯品为白色菱形叶片状结晶，等电点为2.77，熔点为269～271℃。溶于水及盐酸，不溶于乙醇及乙醚，在25℃水中溶解度为0.8，在75℃水中为2.88，在乙醇中为0.00016。在碱性溶液中为左旋性，在酸性溶液中为右旋性。〔α〕25D 为 +5.05°（C＝0.5～2.0，在水中）， 〔α〕25D为 +25.4°（C＝0.5～2.0，在5mol／L HCl中）。 ②L-丙氨酸（L-Alanine，简称L-Ala）的结构与性质 L-Ala存在于所有蛋白质分子中,为中性氨基酸。分子式为C3H7NO2，分子量为89.09，结构式为： L-Ala自水和乙醇中形成菱形结晶，等电点为6.0，分解点为297℃，在25℃水中溶解度为16.65，在75℃水中为28.5，在20℃乙醇中为0.16，不溶于丙酮及乙醚。〔α〕25D 为+18°（C＝0.5～2.0，在水中）， 〔α〕25D为-14.6°（C＝0.5～2.0，在5mol／L HCl中）。 （2）L-Asp和L-Ala的酶转化反应 （3）工艺路线 固定化酶 凡限制在一定的空间范围内并能连续反复的使用的酶都称为固定化酶。 通常采用的固定化方法可大体概括为四种类型：吸附法、共价偶联法、交联法和包埋法。 吸附法 这是通过载体表面和酶分子表面间的次级键相互作用而达到固定目的的方法，又可分：物理吸附和离子交换吸附。 物理吸附是通过氢键、疏水键和π－电子亲和力等物理作用力将酶固定于不溶性载体的方法。 常用的载体有：皂土、硅胶、氧化铝、磷酸钙胶和微孔玻璃等无机吸附剂，纤维素、胶原、赛珞玢以及火棉胶等有机吸附剂。 最常用的交换剂有CM（羧甲基）－纤维素、DEAE（二乙基氨基乙基）－纤维素、DEAE－葡聚糖凝胶等。离子交换剂的吸附容量一般大于物理吸附剂，约50～150mg蛋白／g载体。 共价偶联法 这是借助共价键将酶的活性非必需侧链基团和载体的功能基团进行偶联以制备固定化酶的方法。 常用的载体有：纤维素、葡聚糖凝胶、琼脂糖、聚丙烯酰胺、多聚氨基酸、乙烯与顺丁烯二酸酐共聚物、聚苯乙烯、尼龙等；还有无机载体如多孔玻璃等。 交联法 利用双功能或多功能试剂在酶分子间或酶分子与 惰性蛋白间、或酶分子与载体间进行交联反应以共价键制备固定化酶。 包埋法 将聚合物的单体和酶溶液混合后，再借助聚合促进剂（包括交联剂）的作用进行聚合，将酶包埋于聚合物