过氧化物酶催化反应机理和动力学研究进展.docx

第13卷第4期分子催化V o l. 13, N o. 41999 年 8月JOU RNAL O F M OL ECULA R CA TAL YS IS (CH INA )Aug.1999文章编号: 100123555 (1999)0420312209过氧化物酶催化反应机理和动力学研究进展陈建波, 夏春谷1) , 尉迟力, 李树本(中国科学院兰州化学物理研究所羰基合成与选择氧化国家重点实验室,兰州 730000)关 键 词: 过氧化物酶; 水相; 胶束; 有机相; 反应机理中图分类号: O 643. 12文献标识码:A过氧化物酶(EC1.11)是通过H2O2或相关化合物来催化多种有机和无机物氧化的血红素 蛋白,一般含有铜或铁等金属离子[1].从动物中获得的过氧化物酶主要有甲状腺过氧化物酶、乳过氧化物酶、髓过氧化物酶等; 从植物中获得的过氧化物酶如辣根过氧化物酶、细胞色素C 过氧化物酶, 一般都以正铁血红素 IX 作为辅基. 氯过氧化物酶虽然不是从植物中获得的,但它也以正铁血红素 IX作为辅基.对于过氧化物酶, 其酶反应过程包括以下3个步骤:E + H 2O2CompoundIConpoundI+AH2Compound+.AHConpound+AH2E+.AH即: 过氧化物酶经过两电子氧化而成为化合物I, 血红素辅基转变为Π阳离子基团. 随后化合物I经过单电子还原成为化合物. 化合物I和化合物都是具有催化活性的中间化合物, 都有一个Fe2O 结构, 并存在于有机基团中, 这种有机基团或者是氨基酸残基, 或者是卟啉[2]. I、两种化合物可以分别在光谱索瑞区(Soret region)的400nm 和418nm 左右检测到. 近年来, 在索瑞区330 nm[3]或340 nm[4]处又检测到一种新的中间化合物, 称之为化合物. 我们着重介绍辣根过氧化物酶和微过氧化物酶催化反应机理和动力学近年来的研究进展.1过氧化物酶1. 1辣根过氧化物酶辣根过氧化物酶(Horseradishperoxidase,简称HRP)很长时间以来一直被人们认为是 一种在较高温度下也比较稳定的酶. D unfo rd 等人[ 1 ] 推测,这种性质可能是和与酶相连的碳氢化合物有关. 其主要的物理性质列于表1.辣根过氧化物酶与众多的过氧物酶相比, 价格并不昂贵,对有机溶剂的失活作用抵抗力 较强, 适用的反应底物的范围广, 因此成为研究过氧物酶的首选对象. 在 H 2O 2 存在时, HRP收稿日期: 1998206202, 修回日期: 1998209203.基金项目: 国家自然科学基金资助项目(N o..作者简介: 陈建波, 女, 25 岁,硕士生.1) 通讯联系人.第4期陈建波等:过氧化物酶催化反应机理和动力学研究进展313能催化苯酚、苯胺及其取代物的聚合反应. 由于聚合物具有大 Π共轭体系,因此可用作有机导电聚合物、非线性光学材料及用于制作发光二极管(用于大屏幕全色显示器件)[5].另外,HR P以标记物的形式在免疫分析、分子的酶法分析方面也有广泛用途.表 1 HR P的物理性质T ab le 1 Physical p roperties of HRP.Molecularw eightCarbohydratecontent(%)CrystallizationΚm ax (nm)So ret V isibleΚm ax(nm )IR(cm - 1)39 800～ 4050018. 4M icro scopicneedles403 498 640 950 nderson等人[6]用动力磁场效应研究了HRP的中间化合物,认为HRP循环反应的立体结构可用图1表示.1. 2 微过氧化物酶8图1辣根过氧化物酶的催化循环Fig. 1Catalyticcycleofhorseradishperoxidase微过氧化物酶8(Microperoxidase28,简称MP28)是一种以铁卟啉为辅基的八肽过氧化 物酶, 从细胞色素 C 制得, 以组氨酸为第五配体. M P 28 及其乙酰化形式N2乙酰2微过氧化物 酶8(N2Ac2MP28)是过氧化物酶的主要研究对象.因为大部分铁卟啉易在水中形成Λ2oxo聚 合物, 或不具有易控制的配体区域[ 4 ]. 而M P 28 或N 2A c2M P 28 则是水溶性的、在水中具有最小聚集数的酶[7].光学实验显示,溶液的pH值在1～12之间时,Ac2MP28存在3种与pKa值相联系的离子形式[ 8 ] (见表2).pHFo rm of表 2 M P- 8