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基于快速液相色谱—四级杆飞行时间串联质谱浙贝母特征图谱研究 　　摘要 该文建立了浙贝母甾体类生物碱RRLC-Q-TOF-MS特征图谱的质量评价方法。该方法采用Agilent Eclipse Plus C18色谱柱（2.1 mm×100 mm，1.8 μm），流动相为乙腈-0.1%甲酸和10 mmol · L-1甲酸铵水溶液，梯度洗脱；检测器为Q-TOF-MS并记录一级和二级质谱。在该色谱条件下，对12批浙贝母药材及其混淆品湖北贝母、伊犁贝母的RRLC-Q-TOF-MS特征图谱进行了测定和分析。结果从浙贝母、湖北贝母和伊犁贝母中鉴定了15个甾体类了生物碱，确定了浙贝母中9个共有特征峰。浙贝母和湖北贝母及伊犁贝母的特征图谱有明显差异。通过聚类分析和主成分分析，可对不同来源的浙贝母样品进行初步的质量评价。该文所建立的浙贝母甾体类生物碱成分的特征图谱特征性和专属性强，且方法快速、简便、可靠，可用于全面控制浙贝母的质量。 　　关键词 浙贝母；甾体类生物碱；特征图谱；快速液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱 　　收稿日期 2013-05-20 　　通信作者 *陈碧莲，主任中药师，研究方向为中药质量评价，Tel： （0571E-mail： zsyonly@ 　　作者简介 周建良，主管中药师，博士，研究方向为中药药效物质与质量评价，E-mail： cpuzhou@163.com 浙贝母来源于百合科贝母属植物浙贝母Fritillaria thunbergii Mig.的干燥鳞茎，具有清热化痰止咳、解毒散结消痈等功效，常用于治疗风热咳嗽、痰火咳嗽、肺痈等[1]，是著名的浙八味之一。现代化学和药理学研究表明，浙贝母中的活性成分主要为甾体类生物碱[2]，包括贝母素甲（verticine）、贝母素乙（verticinone）、异贝母素甲（isoverticine）、贝母辛（peimisine）、ebeiedine和ebeiedinone等。《中国药典》2010年版（一部）通过对贝母素甲和贝母素乙的薄层鉴别和最低含量限度来控制浙贝母药材的质量[1]。根据文献报道[3-4]，浙贝母所含活性成分种类与湖北产贝母（包括湖北贝母、蒲圻贝母、鄂北贝母和紫花鄂北贝母）类似，含量上也接近，且在性状上也与湖北贝母相似。因此，只以贝母素甲和贝母素乙为指标成分的质量控制缺乏专属性和科学性。 　　中药特征图谱是中药整体性的化学表征，符合中药整体作用的特点，是近年来中药质量控制方法的一个研究热点。目前，用于贝母甾体类生物碱的分析方法包括薄层扫描法[5]，GC[6]，HPLC-UV[7]，HPLC-ELSD[8-9]和HPLC-MS[3-4]等方法。由于浙贝母所含的甾体类生物碱缺乏有效的挥发性能和紫外发色团，因此GC和HPLC-UV不是检测该类成分的首选方法。HPLC-ELSD作为通用性检测方法虽然对该类成分有响应，但灵敏度低，只能检测含量较高的成分，如贝母素甲和贝母素乙；另外，由于ELSD只能依靠保留时间来对化合物定性，使得在分析复杂的中药成分时可靠性不强。为此，运用更高选择性和灵敏度的质谱检测器将是贝母生物碱分析新的趋势。 　　四级杆飞行时间串联质谱（Q-TOF-MS）是近几年发展起来的一种高端串联质谱技术，由于用TOF进行检测，母离子和产物离子均可获得准确分子量，从而极大地增加了待测成分鉴定的可靠性。快速液相色谱（rapid resolution liquid chromatography， RRLC）是采用了1.8 μm粒径填料的耐高压液相色谱系统，在不牺牲分辨率的前提下具有分析速度快、灵敏度高和溶剂消耗低等优点[10]。当Q-TOF-MS与RRLC技术联用时，可实现中药化学成分的快速、高选择、高灵敏的检测分析。为此，本文在前期研究的基础上[3-4]，采用RRLC-Q-TOF-MS技术对浙贝母的特征图谱进行了研究，使分析速度提高5～10倍以上，并实现了浙贝母主要物质基础的全解析。在此基础上，采用聚类分析和主成分分析对不同产地的浙贝母药材进行质量评价，为浙贝母及其相关药材与制剂的整体质量评价提供了参考和依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 仪器 　　Agilent 6538 Q-TOF-MS系统（Agilent Corp， USA），配有电喷雾（ESI）离子源；Agilent 1290液相色谱系统，配有在线脱气机、二元泵、自动进样器、柱温箱和可变波长检测器；KODO JAC 4020P超声波清洗器；METTLER TOLEDO AG285电子天平。 　　1.2 试药 　　乙腈（色谱纯，Merck），三氯甲烷（分析纯，南京化学试剂有限公司），甲醇（分析纯，杭州化学试剂有限公司），超纯水（Millipore，USA），甲酸铵（分析纯，