临床化学发光免疫法检测AFP分析性能验证及实验方法分析.docVIP

临床化学发光免疫法检测AFP分析性能验证及实验方法分析 　　【摘要】目的对临床化学发光免疫法检测AFP的分析性能验证及实验方法进行分析与探讨。方法对我院2013年1月至2013年3月的60例临床送检血清标本的临床资料进行统计分析，将上述案例随机性地分成两组，每组30人，即对照组与实验组。对照组：采用医院放射免疫法，实验组：采用化学发光免疫法检测。结果对临床资料进行统计发现，实验组的对照组，无显著性差异，有很好的相关性。结论化学发光免疫法的准确性与精密度均优于放射免疫法。 　　【关键词】化学发光免疫法；放射免疫法；AFP；分析性能；实验方法 　　doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2014.01.672文章编号：1004-7484（2014）-01-0556-02 　　化学发光免疫分析是一种新型的标记免疫分析技术，是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫分析等分析方法之后的新一代标记免疫分析技术，是将免疫测定与化学发光相结合的新型技术。整个过程均在全封闭的反应体系中进行，且能够全自动操作，仪器具有反应迅速，灵敏度高，检测限低等优点，总的来说包括抗原抗体特异性结合与化学发光两部分过程[1]。甲胎蛋白（AFP）是原是胚胎的肝细胞，婴儿两个月便逐渐消失，但近些年发现AFP在部分成人体内出现，并发现它是原发性肝癌最灵敏，也是最特异的肿瘤标志物。为了进一步考察该仪器对AFP生物检测限和AFP功能灵敏度的测量，我院参照IUPAC（国际纯粹和应用化学联合会）的规定评价方案，现将60例临床送检血清标本的临床资料进行报道如下： 　　1材料与实验方法 　　1.1应用材料与仪器检测样选用我院2013年1月至2013年3月的60例临床送检血清标本。 　　仪器采用美国Bayer Centaur 240全自动化学发光仪，并配套相关检测试液（包括标记的抗原抗体、含磁性的固相颗粒、稀释液、AFP清洗液、发光试剂等），均采用拜耳公司提供的试剂。放射免疫法采用上海产的γ计数仪（SN-682 型），并配套运用 AFP 试剂盒（中国原子能科学研究所研制）。 　　1.2方法检测时运用AFP稀释液作为空白样品，取一新鲜的血清作为试样，做重复性实验，记录每次检测的浓度值和光强度值。核实两者的精密度、灵敏度与检出限等，数??处理采用线性回归处理。 　　1.3统计学方法根据SPSS13.0软件对提供的数据进行统计学的分析，计量资料为t检验，对所有统计结果采用均数±标准差（χ±s）的形式表示，运用软件进行处理（检验水准α=0.05，双侧检验）作为统计学的评定标准具有统计学的差异。 　　2结果 　　2.1线性试验以AFP稀释液作为空白试剂，再根据要求将标准溶液稀释成不同浓度的溶液，放射免疫法取5ppb、10ppb、50ppb、200ppb、400ppb为标准浓度测定标准曲线，化学发光免疫法取5ppb、10ppb、50ppb、200ppb、400ppb、800ppb为标准浓度测定标准曲线，结果两组数据均有较好的线性关系。 　　2.2重复性试验取一新鲜的血清作为试样，两种方法均进样10次，查看两者的重复性差别，两组仪器均能满足RSD0.05），且相关系数r=0.995，回归方程为y=-1.059+0.921x，两组方法所得数据的相关性良好。 　　2.4回收率试验取混合血清后，再加不同浓度的标准定值血清，用两组方法分别对其进行平均回归率实验，实验得出，放射免疫法的回收率为91.2-108.1%，化学发光免疫法的回收率为92.0-107.8%。化学发光免疫法略优于放射免疫法。 　　2.5检出限以每次做的空白RLUs为基值，以该空白的RLUs值的3倍作为样品中具有的AFP量，或称本法的检测低限。分别对两种方法进行检出限测量，得出化学发光免疫法的检出限为0.95ppb，放射免疫法的检出限为5ppb。化学免疫法在检出限上明显优于放射免疫法[2]。 　　2.6精密度试验取三个梯度浓度（分为低、中、高三个梯度）的试剂分别进行精密度实验，并运用两种方法进行整理对比，见表1。 　　3讨论 　　化学发光免疫技术作为一种新型的分析技术，既具有运用发光检测时的高度敏感性，也同时具有免疫分析时的高度特异性。其原理为将激发态分子回到基态时所释放而产生的发光现象，再运用化学发光系统来为抗原抗体的结合反应做指示系统，从而进行定量检测抗原或抗体的浓度方法，是一种直接的运用发光剂标记抗体的免疫分析方法。由于运用丫啶酯发光剂的优点可以很好的减少非特异性干扰，反应较为简单且迅速，反应灵敏度高，据有关资料显示，该发光剂也很稳定（有效期可长达1年以上）。 　　放射免疫法是目前临床上较为常用的分析方法，其原理是放射性标记的抗原和非标记抗原全部同时与限量的特异性抗体进行竞争性可