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试验四离子交换层析分离单核苷酸
实验四 离子交换层析 分离单核苷酸; 目的要求 ; 离子交换层析（Ion Exchange Chromatography简称为IEC）是以离子交换剂为固定相，特定的离子溶液为流动相，依据各种离子或离子化合物与离子交换剂的结合力不同进行分离纯化的层析方式。 ;;RA+B＋ RB＋A+(RA是阳离子交换剂，B为溶液中的离子或待分离的生物分子）
;平衡装柱
离子交换剂带上反离子(R-O-X+)
上样
样品（A＋, B+ ，C+，等）与反离子（X＋）竞争与电荷基团结合；（结合力A＋ B+Y+C+X＋）
洗脱
洗脱液中的离子成分（Y＋）与样品(A＋等）竞争结合电荷基团，首先C洗下来，随着Y＋浓度增加，B＋洗脱出，最后A＋出来，使样品分离。
所以从上样到洗脱都是根据结合力的大小进行进行的。洗脱液的选择很重要，要使有效成分和杂质分离。
;;1. 单核苷酸的结构
碱水解使核酸降解为2’或3’单核苷酸混合物，在2‘，或3’位带磷酸基团。
;2. 阴离子交换层析分离单核苷酸的依据
单核苷酸为两性电解质，几种单核苷酸的等电点
AMP 2.65
GMP 2.35
CMP 4.5
UMP 1.55
按等电点由高到低：CMPAMPGMPUMP; 3. 2’，3‘单核苷酸等电点的差异
由于2’和3’核苷酸的磷酸基团与碱环的距离不同，所以碱环上碱基基团的pK值有区别，所以2’和3’核苷酸的PI值有区别。2’核苷酸的PI值略高于3‘核苷酸的等电点。所以每种单核苷酸洗脱时出现2个峰。;
4. 离子交换剂的类型
所用的离子交换剂为阴离子交换树脂，所带电荷基团为季铵基。
;离子交换层析分离单核苷酸的实验步骤 ;离子交换层析分离单核苷酸的实验步骤;离子交换层析分离单核苷酸的实验步骤;离子交换层析分离单核苷酸的实验步骤;思考题 ;The End！
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