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子宫内膜异位症组织中神经纤维分布及其与疼痛关系 　　【关键词】子宫内膜异位症；疼痛；神经纤维；神经解剖学；超微结构；神经元特异性烯醇化酶， 　　【中图分类号】R711.71 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）05-0474-02 　　1 研究背景 　　子宫内膜异位症（Endometriosis），简称内异症（EMS），是指具有生长活性的子宫内膜在子宫腔以外的部位种植并呈侵润性生长。子宫内膜异位症病灶分布广泛，可累及盆腔内外多个脏器，形成结节、囊肿等多种病理形态，引起不同的临床症状，如痛经、不孕、盆腔包块等。其中疼痛是子宫内膜异位症最重要的临床症状，约70～80%的患者有不同程度不同形式的疼痛主诉，如痛经、肛门坠痛、大便痛、性交痛、慢性盆腔痛等。子宫内膜异位症引起的疼痛症状重，形式多样，持续时间长，且多周期发作，严重影响患者的生活质量。而目前常规的内异症治疗方法对疼痛的缓解率较低，并且停药后易复发，原因在于对内异症疼痛的发生机制尚不明确，病灶对周围组织的压迫、致痛因子的分泌以及炎性因子的作用都可能参与其发生过程。临床研究表明内异症疼痛的程度与疾病分期无关，但与病灶的分布具有一定的相关性，发生在后盆腔的内异症病灶多引起明显的痛经、肛门坠痛以及深部性交痛等症状，主要包括异位内膜腺体和间质深度侵润的宫骶韧带、子宫直肠窝以及阴道直肠隔等部位。 　　神经解剖学的改变是导致疼痛的重要机制，伤害性刺激因子、神经纤维、神经递质和信号传导通路的异常，可能单独或共同作用于疼痛的发生过程。本课题主要研究不同类型的子宫内膜异位症病灶中神经纤维的种类、数目、结构的改变，探讨其与临床疼痛症状的相关性，同时还观察子宫内膜异位症病灶中的神经纤维与异位腺体、间质和新生血管的空间分布特点，进一步完善神经纤维分布改变引起内异症疼痛的机制，从而为其临床治疗提供新的依据和思路。 　　2 研究目的 　　2.1 比较不同类型的子宫内膜异位症病灶（包括腹膜子宫内膜异位症、卵巢子宫内膜异位囊肿、宫骶韧带子宫内膜异位症结节、子宫直肠窝子宫内膜异位症结节、阴道直肠隔子宫内膜异位症结节）??神经纤维数目的差异，探讨其与内异症疼痛症状、临床分期的关系，探讨应用GnRHa类药物对内异症病灶中神经纤维分布的影响。 　　2.2观察子宫内膜异位症组织中神经纤维形态及超微结构的异常，分析神经纤维与异位内膜腺体或间质、新生血管、炎性因子、雌激素受体、神经元特异性烯醇化酶表达的空间关系，进一步探讨神经纤维分布异常引起子宫内膜异位症疼痛的可能机制。 　　2.3 比较子宫内膜异位症和非子宫内膜异位症患者的子宫内膜组织、传代培养细胞中神经纤维蛋白的分布及神经元特异性烯醇化酶表达的差异，探讨在位内膜在子宫内膜异位症疼痛的神经解剖学机制中可能发挥的作用。 　　2.4 比较子宫内膜异位症和非子宫内膜异位症患者血清以及腹水中神经蛋白、神经递质、神经元特异性烯醇化酶表达水平的差异，探讨新的简单可行的临床检测手段。 　　3 研究方法 　　3.1 应用免疫组织化学方法检测不同子宫内膜异位症组织，包括腹膜内异症病灶、卵巢内异症囊肿壁、宫骶韧带内异症结节、子宫直肠窝内异症结节及阴道直肠隔内异症结节，以及正常腹膜、卵巢成熟性囊性畸胎瘤囊壁、正常宫骶韧带组织中不同神经纤维的分布。 　　3.2 运用图像分析软件进行神经纤维的计数，统计学方法进行不同内异症病灶神经数目的差异性分析以及这种差异性与疼痛症状、临床分期的相关性。 　　3.3 Real-TimePCR方法检测子宫内膜异位症组织中神经标记蛋白（S―100）的表达量。 　　3.4 透射电子显微镜观察子宫内膜异位症病灶中神经纤维的超微结构，观察神经纤维与异位内膜腺体或间质的空间分布情况，并分析其与疼痛症状的相关性。 　　3.5 免疫组织化学方法标记连续切片的子宫内膜异位症组织中新生血管的分布，比较其与神经纤维的空间分布关系。 　　3.6 免疫组织荧光双重标记法观察子宫内膜异位症组织中神经纤维与炎性因子、雌激素受体以及神经元特异性烯醇化酶表达的关系。 　　3.7 Real-TimePCR方法检测子宫内膜异位症组织中神经元特异性烯醇化酶的表达量。 　　3.8 免疫组织化学方法、免疫细胞荧光标记方法、Real-TimePCR比较子宫内膜异位症和非子宫内膜异位症患者在位子宫内膜组织和细胞中神经纤维、神经元特异性烯醇化酶的表达。 　　3.9 应用ELISA方法比较子宫内膜异位症和非子宫内膜异位症患者血清以及腹水中S―100蛋白、P物质、神经元特异性烯醇化酶的表达水平。 　　4 结果 　　4.1 腹膜子宫内膜异位症病灶中神经纤维的数目高于正常腹膜，富骶韧带子宫内膜异位症结节中神经纤维的数目明显高于正常宫骶韧带组织，卵巢