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体细胞重编程研究及其在再生医学中应用前景 　　摘要：体细胞重编程是指分化的体细胞在特定的条件下被逆转后恢复到全能性的状态，或者形成胚胎干细胞系，或者进一步发育成一个新的个体的过程。目前，体细胞重编程的方法主要有四种：核移植、特殊细胞间融合、特定培养条件下的细胞扩增以及病毒转染遗传因子诱导。利用特定多能性遗传基因导入受体细胞中制造而成的细胞称为诱导性多功能干细胞（induced human pluripotent stem，iPS）。人类胚胎干细胞（embryonic stem cells，ES）和人类诱导多能干细胞（induced pluripotent stem cells，iPS）都拥有分化为不同类型干细胞的能力，但iPS细胞更为优越的是iPS可通过人类体细胞的“重设”获得。与ES细胞相比，iPS细胞的获得方法更简便，且不受伦理道德因素的约束，因此被认为是非常有用的研究工具，同时其在再生医学中也有着巨大的潜力。 　　关键词：诱导性多功能干细胞（iPS）重编程条件优化重编程机制再生医学 　　【中图分类号】R4【文献标识码】A【文章编号】1671-8801（2013）03-0002-02 　　1体细胞重编程研究发展 　　由于胚胎干细胞（Embryonic stem cells，ES cells）的生物学特性及其在医疗领域的广阔应用前景，使其一直备受国内外医学科研工作者的青睐。但是，由于人类胚胎干细胞的取材触及伦理道德问题，所以已被很多国家法律明令禁止，相关的研究也因此陷入进退两难的境地。 　　2006年8月，日本的Yamanaka研究组利用反转录病毒载体，分别将24种转录因子按不同组合方式导入小鼠成纤维细胞，成功确定了Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc四种转录因子可将终末分化的细胞重编程为iPS细胞[2]。2007年11月，该研究组又用同样的方法将人皮肤成纤维细胞重编程为iPS细胞，从而正式掀起了iPS细胞应用于疑难疾病临床治疗的研究热潮。 　　2008年4月，美国加利福尼亚大学科学家报告称，他们将实验鼠皮肤细胞改造成iPS细胞，然后成功使其分化成心肌细胞、血管平滑肌细胞及造血细胞。 　　2009年2月，日本东京大学科学家宣布，成功利用人类皮肤细胞制成的iPS细胞制成的iPS细胞培育出血小板，而且从技术上说用iPS细胞培育人类红细胞和白细胞都是可能的。 　　2009年3月伊始??iPS细胞研究便相继迎来两项重大突破，英国和加拿大科学家发现了不借助病毒、安全将普通皮肤细胞转化为iPS细胞的方法；美国科学家则在《细胞》杂志上宣布，他们可以将iPS细胞中因转化需要而植入的有害基因移除，且保证由此获得的神经元细胞的基本功能不受影响。 　　2009年7月，中国科学家周琪和高绍荣等人利用iPS细胞克隆出活体实验鼠，首次证明iPS细胞与胚胎干细胞一样具有全能性。 　　2010年7月27日，日本京都大学iPS细胞研究所中川诚人讲师的研究小组发现，制取iPS细胞的转录基因c-Myc易致癌，应用目前的技术克隆出的活体小鼠中一年后的死亡率为70%，而其中有半数为得癌而死。该研究小组用一种结构相近的L-Myc的转录基因取代这一基因制取人体干细胞，得到的干细胞数量是之前的5倍，而且将这一技术应用于克隆活体小鼠实验发现，活体小鼠的死亡率降到了10%。 　　2iPS形成的细胞内机制浅析 　　最初的遗传研究显示同源转录因子Oct4、Nanog在早期发育和ES细胞判定中是至关重要的。它们在多能胚胎干细胞和囊胚期的内细胞团中都有表达。但是，最近的研究揭示，Nanog只是稳定胚胎干细胞的多能性状态而非维持其多能性。在ES细胞中，Oct4能与HMG-box转录因子Sox2形成异源二聚体共同作用于细胞的多能性。对Oct4，Sox2，Nanog在全基因组上调控基因的研究显示：①Oct，Sox2，Nanog结合在一起共同作用于各自的基因起始区促进转录，如此形成一个循环的自我调控环，从而维持蛋白表达的稳定，可促进多能性的维持；②三个因子常常共同募集到几百个特定的靶基因上，这也解释了为何诱导iPS需要多个基因；③Oct4，Sox2，和Nanog调控的基因有两类，一类被激活，另一类被沉默（激活的基因与多能性有关，沉默的基因与分化有关）。被Oct4，Sox和Nanog沉默的基因往往还募集一种抑制转录因子――PcG蛋白。PcG形成PRCs蛋白复合物家族。其中PRC2催化组蛋白H3K27甲基化，H3K27位的甲基化提供PRC1的结合位点，PRC1使染色体结构更紧密，同时抑制染色体重塑活性以维持基因的沉默状态；④三个因子促进特定microRNAs（miRNAs）的表达，研究证实miRNA在ES细胞基因调控中发挥重要的作用，但具体机制尚不清楚[1]。