失水胁迫下切花月季丝氨酸蛋白酶rhsep1基因相关研究-植物学专业论文.docxVIP

HYPERLINK \l _bookmark0 3.1 丝氨酸蛋白酶 RhSep1 生物信息学分析结果 23 HYPERLINK \l _bookmark1 3.1.1 RhSep1 序列信号肽分析 23 HYPERLINK \l _bookmark2 3.1.2 RhSep1 疏水性分析 23 HYPERLINK \l _bookmark3 3.1.3 RhSep1 蛋白质序列跨膜区分析 24 HYPERLINK \l _bookmark4 3.1.4 RhSep1 蛋白同源性分析 25 HYPERLINK \l _bookmark5 RhSep1 功能位点分析 26 HYPERLINK \l _bookmark6 RhSep1 三级结构预测 27 HYPERLINK \l _bookmark7 3.2 丝氨酸蛋白酶 RhSep1 基因表达载体构建结果 29 HYPERLINK \l _bookmark8 3.2.1 RhSep1 DNA 的制备结果 29 HYPERLINK \l _bookmark9 3.2.2 载体 DNA 的制备结果 29 HYPERLINK \l _bookmark10 3.2.3 pET-28a(+)-RhSep1 测序结果 30 HYPERLINK \l _bookmark11 3.3 重组菌 pET-28a(+)-RhSep1- BL21(DE3)表达结果 30 HYPERLINK \l _bookmark12 3.4 重组菌 pET-28a(+)-RhSep1- BL21(DE3)western blot 结果 31 HYPERLINK \l _bookmark13 3.5 重组菌 pET-28a(+)-RhSep1- BL21(DE3)诱导条件优化结果 31 HYPERLINK \l _bookmark14 3.6 实时定量 PCR 检测 RhSep1 表达水平分析 32 HYPERLINK \l _bookmark15 3.6.1 切花月季花瓣总 RNA 提取结果分析 32 HYPERLINK \l _bookmark16 3.6.2 管家基因 ACTB 检测结果 33 HYPERLINK \l _bookmark17 3.6.3 目的基因 RhSep1 检测结果 34 HYPERLINK \l _bookmark18 3.6.4 标准品和样品扩增曲线和融解曲线分析 36 HYPERLINK \l _bookmark19 3.6.5 目的基因的相对表达量(以 CK-0h 作为对照样品) 37 HYPERLINK \l _bookmark20 4 讨论 38 HYPERLINK \l _bookmark21 4.1 植物失水胁迫初期信号转导基础 38 HYPERLINK \l _bookmark22 4.2 丝氨酸蛋白酶 RhSep1 基因分析 39 HYPERLINK \l _bookmark23 4.3 RhSep1 蛋白酶的异源表达 40 HYPERLINK \l _bookmark24 4.4 Real Time PCR 确定目的基因 RhSep1 在失水胁迫下的相对表达量 42 HYPERLINK \l _bookmark25 5 结论 43 HYPERLINK \l _bookmark26 致 谢 45 HYPERLINK \l _bookmark27 参 考 文 献 46 HYPERLINK \l _bookmark28 作 者 简 介 56 内蒙古农业 内蒙古农业大学硕士学位论文 PAGE 11 PAGE 10切花月 PAGE 10 切花月季花瓣丝氨酸蛋白酶 RhSep1 失水胁迫相关作用的研究 1 引言 1.1 植物失水胁迫信号转导的分子基础 “水是植物生长发育的必要条件，水胁迫影响植物生理的各个方面，而地球表面 一半以上的面积包括大多数耕地内都极容易遭受到干旱的危害”[1]。水胁迫，通常称 为干旱，可以定义为植物缺乏正常生长和完成生命周期所必需的水分[2-4]。 任何环境胁迫都能引起植物全方位的响应，从基因表达的改变到细胞代谢变化， 从植物的生长速率到植物产量。而水胁迫是几大植物逆境胁迫之一，土壤中的可用水 下降导致了植物的渗透胁迫，随着植物水胁迫的加重，细胞中高浓度的 Na 离子抑制 酶活性、细胞分裂和细胞延伸，细胞膜结构被打乱，过量 ROS 的产生导致细胞氧化 胁迫[5-7]。研究表明，在高盐和干旱胁迫下植物中 ABA 的含量显著增加，ABA 促进 气孔关闭，改变基因表达，可溶性溶质的积累等一系列改变以提高植物抵抗逆境的能 力[8-10]。植物激素