急性猪瘟感染过程中IL2 mRNA转录水平研究.docVIP

毕 业 论 文（设 计） 论文（设计）题目：急性猪瘟感染过程中IL-2 mRNA转录水平的研究 姓 名 学 号 院 系 生命科学技术学院 专 业 生物技术 年 级 2011级 指导教师 2015年 5月 15日目 录 摘 要 1 ABSTRACT 2 第1章 前言 3 1.1 研究背景 3 1.2 研究目的 4 1.3 研究意义 4 第2章 材料及方法 6 2.1 材料 6 2.1.1 病毒 6 2.1.2 引物 6 2.1.3 实验动物及分组 6 2.1.4 主要试剂 6 2.1.5 主要溶液配制 6 2.1.6 主要仪器 7 2.2 方法 7 2.2.1 人工感染CSFV 7 2.2.2 猪PBMCs分离 7 2.2.3 PBMCs中总RNA抽提 8 2.2.4 反转录合成cDNA 8 2.2.5 反应体系 9 2.2.6 PCR结果分析 9 结果与结论 11 3.1 QRT-PCR检测IL-2 mRNA转录水平的结果 11 第4章 讨论 12 4.1 QRT-PCR技术检测细胞因子方法的优势 12 4.2 CSFV感染PBMC对IL-2 mRNA转录水平的影响 13 参考文献 14 致 谢 16 摘 要 猪瘟(Classical Swine Fever, CSF)是由猪瘟病毒(Classical Swine Fever Virus, CSFV)引起的一种猪的高发传染病，它具有高发病率和高接触性等特点，细胞白介素-2（Interleukin-2, IL-2)为调控免疫应答的重要因子，在免疫调节中发挥着免疫正调节的作用。本实验意在通过CSFV感染试验猪，根据Trizol法提取猪外周血单核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cell, PBMC）RNA并反转录为cDNA，应用实时荧光定量PCR（Quantitative Real Time PCR, QRT-PCR）技术研究CSFV感染机体后IL-2 mRNA转录水平的变化。结果显示：IL-2 mRNA在CSFV感染后第3d转录水平正常，第7d转录水平最低，第14d转录水平最高，第21d又恢复正常。表明了第7d机体免疫损失最为严重，第14d IL-2诱导机体细胞产生抗病毒感染应答现象最为明显。 关键词：猪瘟病毒；外周血单核细胞；细胞白介素-2；实时荧光定量PCR ABSTRACT Classical swine fever (CSF) is a high incidence of infectious diseases by swine fever virus (CSFV) caused, it has a high incidence and high contact resistance and other characteristics, cell interleukin -2 (IL-2) is an important factor in the regulation of immune responses in immune regulation plays a role in immune enhancement. This experiment is intended by CSFV infection in pigs, according to Trizol extraction porcine peripheral blood mononuclear cells (PBMC) RNA and reverse transcription to cDNA, quantitative real-time PCR (QRT-PCR) Research CSFV IL-2 mRNA transcription levels change after infection. The results showed: IL-2 mRNA in the first three days after CSFV infection transcript levels were normal, the lowest level of the first seven days of transcription, transcription levels highest first 14 da