tgf-β1smads信号通路在脑积水apoeldlr缺失小鼠脑组织中的表达研究-expression of tgf - β 1 smads signal pathway in brain tissue of hydrocephalus apoeldlr deficient mice.docx
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tgf-β1smads信号通路在脑积水apoeldlr缺失小鼠脑组织中的表达研究-expression of tgf - β 1 smads signal pathway in brain tissue of hydrocephalus apoeldlr deficient mice
独 创 声 明
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学位论文作者签名: 导师签字:
签字日期:2010 年 月 日 签字日期:2010 年 月 日
目 录
摘 要 I
ABSTRACT III
缩 写 词 V
第一部分 综 述 1
1. 脑积水 1
1.1 脑积水分类 1
1.2 脑积水发病机理 2
2. TGF-β/Smad 信号通路 3
2.1 TGF-β1 概述 3
2.2 TGF-β1 在中枢神经系统中的表达及作用 3
2.3 TGF-β1 与脑积水 4
2.4 Smad 蛋白 7
3. 细胞外基质 9
4.血脑屏障 11
4.1 血脑屏障的概念、结构和功能 11
4.2 血脑屏障与 MMP-9 11
5. 脑电图 12
6. 本论文研究的目的、内容与意义 13
第二部分 实 验 14
第一章 基因型鉴定 14
1.1 实验材料 14
1.2 方法步骤 16
1.3 实验结果 19
1.4 分析与讨论 21
第二章 脑组织病理形态学观察 22
2.1 实验材料 22
2.2 方法步骤 22
2.3 实验结果 24
2.4 分析与讨论 24
第三章 脑组织中 TGF-β1/Smad 信号通路相关基因的 25
表达水平检测 25
3.1 实验材料 25
3.2 方法步骤 27
3.3 实验结果 32
3.4 分析与讨论 40 第四章 脑组织中 TGF-β1 蛋白的 Western Blot 检测 42 4.1 实验材料 42
4.2 方法步骤 43
4.3 实验结果 44
4.4 分析与讨论 46
i
第五章 脑组织血脑屏障通透性测定 47
5.1 实验材料 47
5.2 方法步骤 47
5.3 实验结果 48
5.4 分析与讨论 50
第六章 皮层脑电波的测定 51
6.1 实验材料 51
6.2 方法步骤 51
6.3 实验结果 51
6.4 分析与讨论 52
小 结 54
参 考 文 献 55
攻读硕士学位期间发表的学术论文 63
致 谢 64
TGF-β1/Smads 信号通路在脑积水 apoE/LDLR 缺失小
鼠脑组织中的表达研究
摘 要
脑积水是以脑萎缩和脑脊液流动障碍为主要特点的神经系统疾病,多种因素参与该疾 病的形成。 转 化生 长因 子 β1( TGF-β1 ) 是 一 种 重要 的 生长 信号 分 子 ,其 主 要通 过
TGF-β1/Smad 信号通路发挥生物学效应,在细胞外基质的积聚中起重要作用。研究表明, TGF-β1 过表达的小鼠能够自发产生脑积水,其机制可能同基质金属蛋白酶-9(MMP-9) 和基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)的异常表达有关;在发生交通性脑积水小鼠 的脑组织中,也发现 TGF-β1 表达量升高。
我们在利用脂代谢关键基因(apoE/LDLR,AL 以及 apoE)敲除的动脉粥样硬化小鼠 模型的研究中发现不同年龄和性别的个体会自发性地发生脑部膨隆,脑室被不同程度的积 水填充。为了探究其发生机制,本实验利用 AL 双基因敲除小鼠,主要研究了 TGF-β1/Smad 信号通路相关因子以及 MMP-9 和 TIMP-1 在该小鼠脑积水发生中的作用。我们选用不同 年龄、不同饲喂条件的脑积水 AL 小鼠及非脑积水对照小鼠,利用 RT-PCR、qRT-PCR、 Western 免疫印记等方法,检测了小鼠脑组织中 TGF-β1/Smad、MMP-9、TIMP-1 等因子 的表达变化特征,以期了解该脂代谢关键基因缺失小鼠发生脑组织发育异常以及脑积水发 生的可能机制。此外,通过伊文思蓝法及脑电图分别测定了 apoE-/-/LDLR-/-、apoE-/- 脑积 水小鼠及同年龄对照小鼠血脑屏障通透性变化及脑细胞电活动情况,以期了解脑积水小鼠 血脑屏障通透性及脑电活动是否出现异常。
通过实验得到如下结果:
1、不同年龄及不
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