114例HBsAg阳性孕妇及其新生儿PBMC 感染HBV状况.docVIP

114例HBsAg阳性孕妇及其新生儿PBMC 感染HBV的状况 作者：王效军 王素萍 李铁钢 冯永亮 【关键词】 外周血单个核细胞；乙型肝炎病毒；原位杂交 【摘要】 目的：了解HBsAg阳性孕妇及其新生儿PBMC HBV感染状况。方法：采用原位杂交(ISH)技术检测114例孕妇和新生儿PBMC涂片中HBV DNA。结果：114例HBsAg阳性孕妇及其新生儿PBMC HBV DNA的检出率分别为28.07%（32/114）和32.46%（37/114）；HBsAg阳性孕妇与其新生儿之间的PBMC HBV感染存在一致性（Kappa=0.52, Plt;0.01）。结论：证实HBsAg阳性孕妇与其新生儿之间的PBMC HBV感染存在一致性。 【关键词】外周血单个核细胞；乙型肝炎病毒；原位杂交 【Abstract】Objective：To observe the status of HBV infection in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from the HBsAgpositive mothers and their neonates. Methods：In situ hybridization (ISH) was used to detect HBV DNA in PBMC smear from 114 HBsAgpositive mothers and theirs newborns. Results：The positive rates of the PBMC HBV infection of the mothers and their neonates were 28.07% and 32.46%, respectively. There was an agreement of the HBV infection status between the mothers and their newborns (Kappa=0.52, Plt;0.01). Conclusion：The result suggests that the HBV infection status from the mothers agrees with that from their newborns. 【Key words】 peripheral blood mononuclear cells; hepatitis B virus; in situ hybridization 乙肝病毒（hepatitis B virus，HBV）宫内感染是导致我国HBsAg慢性携带的重要原因，HBV宫内传播是HBV宫内感染的重要途径，其机制复杂多样。临床上乙肝疫苗（hepatitis B vaccine，HBVac）和乙肝免疫球蛋白（hepatitis B immune globulin，HBIG）的联合应用不能完全阻断HBV母胎之间的宫内传播（intrauterine transmission），有研究［1］证实在HBsAg阳性孕妇及其新生儿外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells，PBMC）中均可检出HBV复制中间体（covalently closed circular, cccDNA）。HBV感染PBMC，影响机体体液免疫和细胞免疫状态，导致HBV持续感染或反复感染。史晓红等［2］曾对新生儿HBsAg阳性孕妇新生儿HBV感染作过研究。为进一步了解孕妇及其新生儿PBMC感染HBV的状况，本文采用原位杂交（ISH）技术对此进行了研究，现将结果报道如下。 1 对象与方法 1.1 研究对象 以2003年7月至2004年11月在太原市传染病院妇产科进行产前检查并分娩的HBsAg阳性孕妇及其新生儿为研究对象。采集孕妇分娩前肘静脉血和新生儿出生24 h内未注射乙肝疫苗的股静脉血，EDTA抗凝，抗凝血于4 ℃保存备用。 1.2 实验室检测 1.2.1 PBMC涂片的制备 抗凝血加等量Ficoll淋巴细胞分离液，2000r/min离心30 min；吸取单核细胞层于另一试管，加2 mL Hank，s 平衡盐溶液，1000 r/min离心10 min，再重复洗涤2次 ；洗涤后的细胞用30μLHank，s 溶液制成细胞悬液；取5～10μL涂于经APES（3氨丙基3乙氧基甲硅烷）防脱处理的载玻片上；70%乙醇固定，自然晾干，4 ℃保存备用。 1.2.2 HBV S基因探针的制备 （1） PCP10HBV DNA重组质粒DNA的提取： 吸取1.0～1.5 mL复苏的PCP10质粒培养液于1.5 mL离心管中，4 ℃下14000 r/