斑马鱼为原产于印度鲤科热带鱼类,具有与.docVIP

 PAGE 9 四种感冒药对斑马鱼胚胎发育的影响 研究背景：婴儿的出生一直是每个家庭最关心的事，人们通过各种各样的方法以确保出生的是健康婴儿。其中很重要的一点就是怀孕期尤其是初期最好不要吃感冒药，否则医生大多会建议终止妊娠。那感冒药究竟会对胚胎发育造成什么影响？会造成哪些器官的畸形？我们决定对此进行一些实验研究。 在实验材料选择上，本来哺乳动物如小白鼠是很好的选择，但是其体内受精，不易观察。斑马鱼是比较常见的热带鱼类，其胚胎受精及发育都在母体外进行,胚胎完全透明，便于观察，加上斑马鱼常年产卵，每次达200～300个，作为实验材料比较容易取得。而且斑马鱼具有与人类相似的循环系统、消化系统等器官系统结构,胚胎发育上的机制也与哺乳动物非常相似,取得的实验结果对哺乳动物可能有一定借鉴价值。因此，我们决定选择斑马鱼作为实验材料。 1 材料与方法 1.1 实验动物 以斑马鱼(Danio rerio) 受精后2h即2hpf（hour post-fertilization）胚胎为实验材料。 将购来的亲鱼饲养于水族箱中,水温25±1℃，光照/黑暗周期14h/10h，每日喂2次冷冻鱼虫。受精卵由清晨雌雄鱼交配获得,收集后，在解剖镜下挑选出分裂正常的受精卵，进行试验。 1.2 实验试剂 四种感冒药：酚氨咖敏片（克感敏）、e康－复方氨酚烷胺胶囊、日夜百服咛－氨酚伪麻美芬片（日片）和正柴胡饮颗粒，按使用剂量，每片各取10％溶于50ml蒸馏水，药片具体成分见表1。 酚氨咖敏片试液，简称a液；复方氨酚烷胺胶囊试液，简称b液；氨酚伪麻美芬片（日片）试液，简称c液；正柴胡饮颗粒试液，简称d液。 每种试液加水倍比稀释，共得六组浓度，分别为1:1，1:2，1:4，1:8，1:16，1:32。 1.3 实验仪器 解剖镜，控温水族箱，24孔细胞培养板，96孔细胞培养板，微电脑光照恒温培养箱，电子天平。 1.4 实验方法 选用24孔细胞培养板，每孔加入2.5ml试液（两组平行），每孔放15枚胚胎，置于 25°C的光照培养箱中孵化。观察并记录其死亡数。 另选用96孔细胞培养板，每孔加入约1ml试液（八组平行，设空白对照组），每孔放1枚胚胎，置于25°C的光照培养箱中孵化。观察并记录每个细胞的发育状况。 2 实验结果 2.1 斑马鱼胚胎发育 斑马鱼受精卵受精后4小时（图1，A）已分裂出数以千计的细胞，但细胞并没有增大，所以越分裂越小，细胞界限渐变模糊。48小时已基本发育成形，72小时，幼鱼出膜，120小时，各器官的发育更加成熟完备。具体发育过程如图1所示。 图1：斑马鱼胚胎发育过程 （A 4小时，B 8小时，C 24小时，D 32小时，E 48小时，F 72小时，G 96小时，H 120小时） 2.2 不同感冒药对斑马鱼胚胎死亡率的影响 将受精后2小时内的斑马鱼胚胎在6个浓度梯度的试液中连续浸泡五天，分别记录其每天死亡数，数据见表2。第一天和第二天的死亡数较高，第三天和第四天较少，第五天死亡数又明显增加（图2－5）。 空白对照：48小时胚胎死亡率为26.67％，120小时胚胎死亡率为26.67％。 酚氨咖敏片（a液）（图2）:当浓度为1:1时，48小时胚胎死亡率为66.67％，120小时胚胎死亡率达93.33％；当浓度为1:8时，48小时胚胎死亡率为40％，120小时胚胎的死亡率为46.70％；当浓度为1:32时，48小时胚胎死亡率为20％，120小时胚胎的死亡率为33.33％。 复方氨酚烷胺胶囊（b液）（图3）：当浓度为1:1时，48小时胚胎死亡率为70％，120小时胚胎死亡率达100％；当浓度为1:8时，48小时胚胎死亡率为53.33％，120小时胚胎的死亡率为66.67％；当浓度为1:32时，48小时胚胎死亡率为30％，120小时胚胎的死亡率为46.33％。 氨酚伪麻美芬片（c液）（图4）：当浓度为1:1时，48小时胚胎死亡率为93.33％，72小时胚胎死亡率达100％；当浓度为1:8时，48小时胚胎死亡率为46.67％，120小时胚胎的死亡率为76.67％；当浓度为1:32时，48小时胚胎死亡率为33.33％，120小时胚胎的死亡率为50％。 正柴胡饮颗（d液）（图5）：当浓度为1:1时，24小时胚胎死亡率达100％；当浓度为1:8时，48小时胚胎死亡率为66.67％，120小时胚胎的死亡率为93.33％；当浓度为1:32时，48小时胚胎死亡率为36.67％，120小时胚胎的死亡率为53.33％。 图2－5：不同试液对斑马鱼胚胎死亡率的影响 2.3 不同感冒药对斑马鱼胚胎发育外形的影响 2.3.1 酚氨咖敏片试液（a液）处理后的胚胎 24hpf，差异不大。 48hpf（图6）， 1，1:2，1:4，1:8浓度表现出发育延迟，色素细胞发育不正常。 7