三七总皂苷对酒精诱导兔成骨细胞中骨钙素mrna表达影响-中医骨伤科学专业论文.docxVIP

英文缩写英文全称中文PBSphosphate buffer saline磷酸缓冲液RNaseribonuclease核糖核酸酶PIpropidium iodide碘化丙啶ELISAenzyme-linked immunosorbnent assay酶联免疫吸附法cDNAcomplementary deoxyribonucleic acid反向转录脱氧核糖核酸Ssencond秒TUNELterminal-deoxynucleotidyltransferase mediated nick end labeling脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标 记法mRNAmessenger ribonucleic acid信使核糖核酸 PNPP4-nitrophenyl phosphate,hexahydrate磷酸硝基苯底物液 CFU-Fcolony forming unit-fibroblast成纤维样细胞集落 MSCmesenchymal stem cells间充质干细胞 MAPCsmultipotent adult progenitor cells多潜能成体干细胞L-DMEMlow-glucose dulbeccomodifiedeagle medium低糖培养基IOPCInducible osteogenic precursor cell骨祖细胞DOPCdetermined osteogenic precursor cell定向性骨祖细胞bFGFbasic fibroblast growth factor碱性成纤维细胞生长因子TGF-βtransforming growth factor betal转化生长因子 βBMPbone morphogenetic protein骨形态发生蛋白CBF-αcore binding factor α核心结合因子α中文摘要目的：通过检测三七总皂苷对酒精作用于骨髓基质干细胞后成骨相关基 因骨钙素ｍRNA表达的影响，从基因表达的层面上来研究三七总皂苷防治 酒精性股骨头缺血坏死的作用机制。 方法：抽取四周龄大白兔的骨髓，采用密度梯度离心法与贴壁法相结合 体外分离、培养兔骨髓基质干细胞。取第 3 代细胞,随机分为四组:空白 组（A 组）、模型组(酒精组,B 组)、实验组 1(酒精+三七总皂苷 50ug/ml,C1 组)和实验组 2(酒精+三七总皂苷 100ug/ml,C2 组)。检测四组培养液中碱 性磷酸酶、甘油三酯、骨钙素的含量及骨钙素ｍRNA 的表达。 结果：(1)提取的骨髓基质干细胞呈贴壁生长，诱导后可向成骨细胞分化， 细胞呈成骨细胞形态为梭形和多角形。细胞连续培养可以互相重叠呈复 层生长，无接触抑制现象，并可形成钙化结节；(2)分组干预 14 天,模型 组细胞内 ALP 活性[(25±8)U/100 mg 蛋白]明显降低,显著低于实验组 1[(35±9)U/100mg 蛋白]、实验组 2[(38±10)U/100mg 蛋白]和空白组[(39±9)U/100mg 蛋白],P0.05。两实验组细胞内 ALP 活性,与空白组比较差 异无统计学意义,P0.05。干预 21 天,模型组脂滴最多,两实验组较模型组明显减少(P0.05),空白组未见明显脂滴出现。检测实验组 1、实验组 2 和空白组中细胞内甘油三酯含量分别是(3.86±0.18)μg/孔、(3.80± 0.19)μg/孔和(3.76±0.12)μg/孔, 而模型组是(9.86±0.28)μg/孔。 而 骨 钙 素 的 含 量 分 别 是 ： 4.36-17.51ug/L 、 4.95-19.46ug/L 、 5.42-20.33ug/L、2.81-15.62ug/L，骨钙素ｍRNA 的表达分别为：0.795±0.028、0.897±0.035、0.927±0.021、0.380±0.026，两实验组细胞内骨钙素含量及骨钙素ｍRNA 的表达 ,与空白组比较差异无统计学意 义,P0.05。结论：⑴骨髓基质干细胞具有来源充足，取材方便，创伤小无明显并发 症，而且其分化增殖能力较强，成骨能力确定；⑵从骨髓中分离、培养单个干细胞呈贴壁生长，成纤维细胞样外观；⑶三七总皂苷确能促进被酒精干预后的骨髓基质细胞向成骨细胞分化，为中药防治酒精性股骨头 缺血坏死提供新的治疗靶点，并为下一步动物试验与临床应用提供科学 理论依据。关键词 三七总皂苷；骨髓基质干细胞；成骨细胞；分化Experimental study on BMSCs are cultured by panax notoginsenosidesandalcoholtowardsosteoblastsABSTRACTObjective: To ob