日本公布畜水产品中吡喹酮.docVIP

34 - 21 - 日本公布的畜水产品中吡喹酮、亮绿以及农产品中噻酰菌胺（Tiadinil）等的检测方法。 附件：1.吡喹酮的检测方法（畜水产品） 2.结晶紫、亮绿、亚甲基蓝的检测方法（畜水产品） 3.磺胺喹噁啉、磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、新诺明、磺胺甲氧哒嗪、磺胺甲基嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶和Sulfisozole(磺胺二甲异噁唑)检测方法（畜水产品） 4.チアジニル（Tiadinil）检测方法（农产品） 5.三氯乙酸钠检测方法（农产品） 附件1： 吡喹酮的检测方法（畜水产品） 1．分析目标化合物 吡喹酮 2．仪器设备 带紫外分光光度检测器的高效液相色谱仪（HPLC-UV）或多波长检测器的高效液相色谱仪（HPLC-DAD）·液相色谱-质谱仪（LC/MS） 3．试剂 除下列试剂外，使用总则2所列的试剂。 乙腈 色谱纯 水 液相色谱用 甲醇 液相色谱用 吡喹酮标准品：含吡喹酮98％以上，熔点为136～140℃。 4．试验溶液的制备 1）提取 准确称取样品5.00g，加入30mL乙腈均质5min后，2800r/min离心5min，取乙腈层。残留物中加入30mL乙腈，震荡器激烈震荡5min混匀后，2800r/min离心5min，合并乙腈层，加入30mL乙腈饱和正己烷，震荡器激烈震荡5min，静止，取乙腈层于磨口减压瓶中，45℃以下浓缩，除去乙腈。残渣用10mL水：甲醇（3：2）混合溶液溶解。 2） 在十八烷基硅胶柱（1000 mg）中，顺次注入10mL甲醇及15mL水，舍弃流出液后将1）得到的提取液注入柱中，注入25mL水：甲醇（3：2）混合溶液，弃去流出液。注入10mL甲醇洗脱，收集洗脱液于磨口减压瓶中，45℃以下浓缩，除去甲醇。残渣加入2mL乙酸乙酯：正己烷（1：4）混合溶液溶解 3）在硅胶小柱（690 mg）中注入5mL乙酸乙酯：正己烷（1：4）混合溶液，弃去流出液后注入2）得到的溶液，注入8mL乙酸乙酯：正己烷（1：4）混合溶液，弃去流出液。注入10mL乙酸乙酯：正己烷（3：2）混合溶，收集流出液于磨口减压瓶中，45℃以下除去乙酸乙酯：正己烷（3：2）混合溶液，残渣用1.0mL乙腈：水（1：2）混合溶液溶解，此为试验溶液。 5．标准曲线的制作 将吡喹酮标准品溶解在乙腈中，配制成10mg/100mL溶液。用乙腈：水（1：2）混合溶液稀释成0.05～2.0mg/L的溶液。分别注入HPLC-UV或HPLC-DAD中，峰高法或峰面积法绘制成标准曲线。 6．定量试验 试验溶液注入HPLC-UV或HPLC-DAD中，根据5的标准曲线求得吡喹酮含量。 7．确证试验 用LC/MS或LC/MS-MS确证。 8．测定条件 HPLC 检测器：UV或DAD（波长210nm附近） 色谱柱：十八烷基甲硅烷基化硅胶：内径2～6mm、长150～300mm、粒径2～5μm 柱温度：40℃ 流动相：乙腈：水（1：2）混合溶液 保留时间标准：18 分钟 9．测定低限 0.01mg/kg 10．注意事项 1）检测方法概述 本方法用乙腈提取样品中吡喹酮，使用乙腈饱和正己烷洗净，用十八烷基硅胶柱、硅胶柱净化后， HPLC-UV或HP测定、LC/MS或确证。 2）注意点 = 1 \* GB3 ① 使用LC-UV、LC-DAD、LC/MS、LC/MS- MS等测定，使用内径为3.0mm的色谱柱时，进样量为10μL。应根据使用的色谱柱及仪器选择适当的进样量。 = 2 \* GB3 ② 使用LC/MS进行分析测定时，请根据仪器选择适当的离子化条件及离子。 = 3 \* GB3 ③ 使用LC-UV、LC-DAD分析测定，定量有困难时，请选择LC/MS、LC/MS- MS进行定量。 11．参考文献 无 12．类型 C 附件2： 结晶紫、亮绿、亚甲基蓝的检测方法 （畜水产品） 1.分析目标化合物 农药等成分物质 分析目标化合物 结晶紫 结晶紫 亮绿 亮绿 亚甲基蓝 亚甲基蓝 2．仪器设备 带可见分光光度检测器的高效液相色谱（LC-VIS） 液相色谱—质谱仪（LC/MS） 3．试剂 除下列试剂外，使用总则2所列的试剂。 乙腈 色谱纯 水 液相色谱用 甲酸铵 特级 柠檬酸·磷酸缓冲液（pH3.0） 第一液：称取57.6g柠檬酸，加水溶解至1，000ml。 第二液：称取228g磷酸三钠，加水溶解至1，000ml。 将第二液加入第一液中混合，调节pH值至3.0。 结晶紫标准品：含结晶紫(C25H30ClN3:407.98)94％以上，熔点为215℃。8774 亮绿标准品：含亮绿（C27H34N2O4S 482.64)95％以上，熔点为180℃。 亚甲基蓝标准品：含亚甲基蓝（C16H18N3SCl