植物激素对愈伤组织形成和分化影响 植物组织培养技术.pptVIP

植物激素对愈伤组织形成和分化的影响 植物组织培养一些的概念 外植体（explant）：在植物组织培养过程中，从植物体上被分离下来的，接种在培养基上，供培养用的原生质体、细胞、组织、器官等成为外植体。 愈伤组织（callus）：植物受伤后的伤口处或在植物组织培养中外植体切口处不断增殖产生的一团不定形的薄壁组织。 脱分化（dedifferentiation）：指已分化的组织又恢复到无分化的状态。在组织培养过程中，将已经分化的茎、叶、花等外植体进行培养，令其形成愈伤组织，回到没有分化的状态，称为脱分化。 再分化（redifferentiation）：指在植物组织培养中，对处于脱分化状态的愈伤组织进行培养，诱导其形成新的植物体的过程。 植株再生（plant regeneration）：指通过组织培养技术将植物的细胞、组织、器官培养成完整植株的过程。 试管苗（test-tube plantlet）：指在无菌条件下的人工培养基上，对植物细胞、组织或器官进行培养所获得的再生植株。 初代培养（primary culture）：指在组织培养过程中，最初建立的外植体无菌培养阶段。 继代培养（subculture）：在组织培养过程中，当外植体被接种一段时间后，将已经形成愈伤组织或已经分化根、茎、叶、花等的培养物重新切割，转接到其它培养基上以进一步扩大培养的过程称为继代培养。 一、实验目的 1.掌握植物组织培养的原理，学会植物组织培养的基本操作过程和技术。 2.理解植物激素在器官分化中的作用。 二、实验原理 植物细胞具有全能性：即每个植物细胞包含着能产生完整植株的全部遗传基因。从理论上讲，只要条件合适，包含着全部遗传基因的细胞都能分裂分化，产生完整的植株。 三、实验材料 四、实验步骤： 植物体 分离 灭菌 ? 外植体、接种培养 ? 脱分化 ④ 细胞分裂形成愈伤组织 再分化 形成胚状体 ⑤ 幼根、幼芽 小植株 ①培养基的配制: MS ②灭菌 ③接种：接种室消毒接种的程序： 自来水 70%乙醇 0.1%升汞 无菌水 材料 数次 30S 8min 冲洗 漂洗 消毒 冲洗 解剖刀 镊子 3～4次 小块 培养基 封口包扎 切割 转移 ④保温培养  将三角瓶或试管等，放在保温箱或培养室中去培养，培养室一般采用人工光照。本次实验培养室温度20~25℃，用40W日光灯提供光源，培养2 ~3周。 五、实验结果与分析 1.正常情况下，一般经过2～3周，在组织切口处将产生大量愈伤组织。 2.若材料消毒时间不够、操作不严格（操作过程中染菌）或其他容易染菌的原因，都会导致实验失败。 3.材料消毒时间过长容易使细胞褐化或杀死植物细胞，使细胞失去全能性。 六、实验注意事项 1. 本实验为无菌培养，要特别注意消毒和清洁工作，否则将引起严重污染； 2. 高压消毒要严格按规定进行，压力过高和时间过长不仅会使琼脂变成溶胶状态，而且易出危险。 3. 本实验周期长，一定要坚持观察和记录。 七、思考题 1.植物组织培养为什么用蔗糖而不用葡萄糖？ 2.培养基不凝固的原因？ 3.材料被污染的原因可能有哪些？ 1.培养基的种类：MS培养基、B5培养基、White培养基、N6培养基等目前以Ms培养基最为常用。 2.MS培养基的组成成分： （1）无机盐：包括大量元素和微量元素 （2）碳源：一般以2~4%蔗糖为好。 （3）维生素类物质： （4）生长调节剂： （5）有机附加物： 3.培养基的制备： 母液①：50ml 母液②：5ml 烧杯 母液③：5ml 母液④：5ml 定容