叶绿素分解代谢中叶绿素酶作为限速酶进行翻译后调节.docVIP

The Plant Cell, Vol. 19: 1007–1022, March 2007, a 2007 American Society of Plant Biologists Chlorophyllase Is a Rate-Limiting Enzyme in Chlorophyll Catabolism and Is Posttranslationally Regulated Smadar Harpaz-Saad,a,b Tamar Azoulay,a,b Tzahi Arazi,a Eran Ben-Yaakov,a,b Anahit Mett,a Yoel M. Shiboleth,c Stefan Ho¨ rtensteiner,d David Gidoni,a Amit Gal-On,c Eliezer E. Goldschmidt,b and Yoram Eyala,1 叶绿素酶是叶绿素分解代谢中的限速酶并受翻译后调节 叶绿素在光合作用中捕获光能起到了重要的作用，但是叶绿素分解代谢中的限速步骤和分解代谢中酶的调节机制还不清楚。为了研究叶绿素酶(chlase)——叶绿素分解代谢途径中第一个酶——的作用和调节机制，我们在两个不同的植株系统中表达了柑橘(Citrus sinensis)叶绿素酶的两个不同类型：前体叶绿素酶和成熟叶绿素酶：（1）南瓜(Cucurbita pepo)植株使用的是病毒载体表达系统；（2）短暂转化烟草(Nicotiana tabacum)原生质体。全长柑橘叶绿素酶的表达在原生质体中导致了非常有限的叶绿素分解，在整株植株中没有观察到叶片不同的表型；而表达缺乏N端21个氨基酸的叶绿素酶(ChlaseΔ)，类似于成熟蛋白，导致了在烟草原生质体和南瓜叶片中大量的叶绿素分解。在低光照下生长的表达ChlaseΔ的南瓜叶片呈现出显著的黄萎病表型，而在自然光下生长的此类南瓜叶片出现了拟光损伤表型，证明了叶绿素酸酯的积累，光中毒叶绿素分解产物。全长和成熟类型的柑橘叶绿素酶定位于表达的烟草原生质体叶绿体膜组份上，并在此处对N端21个氨基酸的加工。在两个植株系统我们都证实了叶绿素酶在叶绿素分解代谢中作为限速酶，并且受翻译后调节。 前言 叶绿素分子在光合作用中收集光能起到了重要的作用。它作为多聚蛋白色素光合复合物的一部份发挥其功能，叶绿素捕获一个光子是转换光能成为化学能再储存为碳同化物的第一步。因为节机制还相当不清楚(Kr?utler and Matile, 1999; H?rtensteiner, 2006)。 (Goldschmidt, 2001)，受到环境光抑制(Prasil et al., 1992; Andersson and Barber, 1996)。在对植株组织中叶绿素分解产物的鉴定和描述后，叶绿素分解代谢途径的研究最近取得了巨大的进展(Amir-Shapira et al., 1987; Engel et al., 1991; Matile et al., 1996; H? rtensteiner, 1999)(H?rtensteiner, 1999, 2004; Matile et al., 1999;Takamiya et al., 2000)。因此，叶绿素分解是一个多步的酶催化过程，并且这里面包括的主要的酶在几年前已经被分离出来(Terpstra,1981; Trebitsh et al., 1993;Rodoni et al., 1997;Tsuchiya et al.,1997;H?rtensteiner et al., 1998)，这些酶的基因迟迟未被克隆出来成为了研究叶绿素分解代谢的主要障碍(Takamiya et al., 2000)。近几年分解代谢途径中关键酶基因得以分离(叶绿素酶[Jacob-Wilk et al., 1999; Tsuchiya et al., 1999]; 红叶绿素分解代谢还原酶[Wuthrich et al., 2000]; 脱镁叶绿素酸酯加氧酶[Pru?inská et al., 2003])为深入研究这些酶在叶绿素分解中的作用和调节作用提供了一个重要的工具。 编码叶绿素酶的第一个基因是(Jacob-Wilk et al., 1999; Tsuchiya et al., 1999)从柑橘(Citrus sinensis)和藜属(Chenopodium)藜属(Chenopodium)肽的特点(藜属(Chenopodium)植物的序列更接近于内质网信号肽[Takamiya et al., 2000])，输出后可以发生在液泡内(Tsuchiya et al., 1999;Takamiya et al., 2000)基因(Jacob-Wilk et al