苯并a芘诱导beas2b细胞恶性转化及其转化过程中基因表达模式的研究-study on benzo a pyrene - induced malignant transformation of bea s2 b cells and gene expression patterns during transformation.docxVIP

4 4 虫在并〈川在eì:暗导 B队 S-2B iI!j性转化及其转化过程中基则褒 j在模式的研究 缩略词表 英文缩写 B(a)P 英文 称 Benzo(a]pynme 中文余称 苯并 (a)商 BEAS.2B Immortalized Human Bronchia) 永生化人文气臂上皮细胞 Epithelial CeII CBS Calf Bovine Serum 小牛血消 FBS Fetal Bo世皿e Sen且m 胎牛血消 DMSO Dimetbyl Sulfoxide 二甲基 枫 PE Plating Emciency 接种效率 CFE Colony Formlng Emciency 克隆形成事 LMP AlG PBS SPF HE Low Melting Point 低熔点琼脂糖 Anchor Independent Growth 铺着独立性生长 Phosphate.BuOer暗d Saline 磷酸盐缓冲液 Speclflc Pathogen Free 无特殊病原体 Hemaωxylin.eosin 苏木索一伊红 OD Op创ω1Density 光密度 笨并.)能诱导 笨并.)能诱导 B队S.2B í!I;i性转化及其转化过程中 附表达模式的研究 2 2 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工 作.除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已 经发表或撰写过的研究成果。与我一间工作的问志对本研究所做的任 何贡献均已在论文中作了明确的说明并表乖谢意，本人承担本声明的 法律责任. 学位论文作者签名:朔础 树日期:如7年5月/句 学位论文使用授板书声明 本人完会了解第二军民大学有关保留、使用学位论文的规定，有 权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文 被查阅和借阅.本人授权第二军医大学可以将学位论文的全部或部分 内容编入有关数据库进抒检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手 段保存、汇编学位论文. (保暗的学位论文在解密盾适用本授权书) 学位论文作者签名:如战 导师签名: f 也 签字日期:叮年 _r}j r 8:a 签字叫:叫年 Y 月叫 笨并 .J 11;诱粤 B队 8-2日恶i!转化，;J\转化过稳中黎闵我ì.!i筷式的研究 PAGE PAGE 5 中文摘要 肺癌是人类最常见的恶性肿瘤之一，发病率及死亡率增长迅速，世界卫生组 织统计，估计有 1352132 新发病例和 1178918 人死亡(WHO，2ω2). 发达国家发 病来高于发展中国家。肺癌发病率近年来在我国增长很快， 2002 年我因肺癌发病 男性为 26晋650 人，女性为 126718 入仰HO，2∞匀。肺癌的自然病程中临床症状 出现较晚，传统的放疗、化疗及手术治疗并不能降低病死率.因此，早期发 现、早期诊断.早期治疗气是降低肺德死亡率的建要措施，而这些都将 1辈子肺 癌发病机制的阎明. 肺癌机制研究的方法目前主要包括对人群的研究，以及利用动物模型，细胞 恶性转化模型进行研究。对于细胞磁性转化模型的研究火致分为三类细胞，成纤 维细胞，胚胎肺细胞，以及人交气管上皮细胞，成纤维细胞与胚胎肺细胞，培养 简单，成本低，人支气管上皮细胞的培养较困难，且费用很高，但就肺癌的组织 学类型而言，除了肺腺癌中的细支气管肺泡癌之外，其余各种类型的肺癌均起源 于人文气管上皮细胞。 苯并 (a) 珑是日知的可致肺癌的致癌物，空气、土壤、水及食物中均有它 的存在，食品制作与加工中，温度超过 180 度就会有苯并 (a) 花的产生。它也 有机物质的高温分解和不完全燃烧形成，也可由人类生产和生活活动产生以及自 然生成，日常生活中经常被摄入到人体，是一种广泛存在的环境污染致癌物。 近儿年来对肺癌组织及惑性转化的细胞进行了大量的研究，筛选了一批基因 及2蛋白质，也观察了某些利用肺癌组织筛选出的己知基因在转化细胞中的表达情 况，但是由于研究对象是癌变后的细胞和组织，并不…定能说明找到的是真正关 键的黎囚，而且肺癌的发生不是由于一个两个恭因而是多个基因共同作用的结 果。我们认为要真正解决肺癌的早期发现、早期诊断问题，首先需要寻找癌变的 关键阶段，然后阐明其变化特征和机制。 本研究首先建立了已知致癌物 B(a)P 诱导人支气管上皮细胞转化的细胞模 笨并 (a) 能满导 B且也S-2B wl性转化提3号转化过程中主盖因表达模式的研究 裂，在确定细胞怒伎转化的基础上，利用慕因芯片分析致癌物作用后交细胞转化 过程中不同代次细胞基因组的农达变化模式，为寻找出可能发生癌变的关键阶 段、揭示致癌机制提供科学依据。 方法g (1) 采用永生化人文气智上皮细胞 BEAS-2B. 分设 1∞Inmo?(a)