吡柔比星诱导人膀胱癌t24细胞凋亡及其机制的实验分析-experimental analysis on apoptosis of human bladder cancer t24 cells induced by pirarubicin and its mechanism.docx

吡柔比星诱导人膀胱癌 T24 细胞凋亡及其机制 的实验研究中 文 摘 要目的：研究不同质量浓度吡柔比星(Pirarubicin，THP)对膀胱癌 T24 细 胞增殖，细胞周期及凋亡的影响，并检测其对 Survivin mRNA 的表达变化， 探讨 THP 对膀胱癌 T24 细胞凋亡的诱导作用及其机制，为 THP 在膀胱癌的 灌注治疗中提供一定的实验理论依据。方法：1.使用不同质量浓度的 THP(0、0.1、1、10μg/ml)作用膀胱癌细 胞株 T24，在倒置相差显微镜下观察细胞形态学的改变。2.使用不同质量浓 度的 THP(0、0.1、1、10μg/ml)处理膀胱癌细胞株 T24，应用 CCK-8 法实验 检测 THP 对人膀胱癌细胞株 T24 增殖的影响。3.应用流式细胞仪碘化丙啶 (PI)单染法，检测不同浓度 THP 作用 T24 细胞株 24 小时后对其细胞周期的 影响。4.Annexin-V/PI 双染色法，检测 THP 处理膀胱癌 T24 细胞株 24 小时 后，不同质量浓度(0、0.1、1、10μg/ml)THP 对膀胱癌 T24 细胞凋亡的影响。 5.应用 RT-PCR 方法检测在不同质量浓度(0、0.1、1、10μg/ml)THP 处理 T24 细胞 24 小时后，Survivin mRNA 在 T24 细胞中的表达变化。结果：1.在倒置相差显微镜下可观察到，空白对照组的 T24 细胞，呈多 边形、贴壁生长，胞质饱满，相邻细胞相互融合，生长非常旺盛。经 THP 作用后，随着浓度的增加，细胞变圆，体积开始减小，细胞核固缩出现， 核颜色加深，折光性增强，并且部分细胞出现了漂浮及坏死的现象，表现 为浓度的依赖性。2.经 CCK-8 法检测 24h，48h，72h 四组细胞增殖水平， 根据测定的 OD 值比较各组细胞生长情况，与对照组比较，各组浓度的 THP 在 24h，48h，72h 均可以抑制膀胱癌 T24 细胞的增殖，差异具有统计学意义（P0.05），计算加入 THP 组 24h，48h，72h 增殖抑制率，我们发现其抑制作用呈现一定的时间及浓度依赖性（P0.05）。3. PI 单染法测细胞周期显 示：不同浓度 THP(0、0.1、1、10μg/ml)作用于膀胱癌 T24 细胞 24h 后，停 滞于 G2/M 期细胞百分率分别为：（5.45±0.51）%、（7.91±1.33）%、（81.34±1.43）%、（88.97±2.95）%，各实验组 G2/M 期细胞百分率明显增加，与 对照组比较表现为浓度依赖性（P0.05）。4.Annexin V/PI 双染色法检测显 示 THP 能诱导膀胱癌 T24 细胞凋亡，(0、0.1、1、10μg/ml)THP 作用于膀 胱癌 T24 细胞 24h 后，凋亡率分别为：(6.18±0.27)%、(15.29±0.98)%、(19.56±1.45)%、(23.81±0.81)%，与对照组比较，各实验组凋亡率明显增加（P0.05）。5. 不同质量浓度(0、0.1、1、10μg/ml)THP 处理 T24 细胞后， 使 Survivin mRNA 的表达显著下调，表现为浓度依赖性（P0.01）。结论：THP 在体外可以抑制膀胱癌 T24 细胞增殖,并且表现为一定时间 以及浓度的依赖性, 即随着 THP 药物浓度的增加和作用时间的延长，对膀 胱癌 T24 细胞的生长抑制作用越来越明显。THP 能够诱导膀胱癌 T24 细胞 的凋亡，将细胞阻滞于 G2/M 期，在一定范围内表现为浓度的依赖性。其机 制可能和 Survivin mRNA 的表达下调有关。关键词：膀胱肿瘤；吡柔比星；细胞凋亡；T24 细胞株；Survivin；Research of the Inducing Effect of Pirarubicin To Apoptosis and Its Mechanisms in BladderCancer Cell T24ABSTRACTObjective: To investigate the impact of different concentrations of THP on proliferation, cell cycle and apoptosis in bladder cancer cell line T24, to detect the expression changes of Survivin mRNA, and to investigate the apoptosis induction and the mechanisms of THP in bladder cancer cell line. Our research will provide a the