高效液相色谱光法测定多胺含量及鸟氨酸脱羧酶（ODC）活性的研讨.pdfVIP

青岛科技大学研究生论文 高效液相色谱荧光法测定多胺含量及乌氨酸脱羧酶 (ODC)活性的研究 摘要 多胺是从微生物到高等生物所有生物体内广泛存在的小分子碱性脂肪族化 着重要的作用，直接参与生物体内的多种生理活动，如核酸的复制、转录和翻译、 蛋囱质的合成以及稳定膜的结构，是生物体生长和细胞代谢所必需的痕量活性物 质，生物体内多胺的含量与组织的瘸变、生长发育的水平有直接的关系。因此开 发选择性好、灵敏度高、经济实用的分析多胺的方法一直是人们关注和研究的热 点之一。而鸟氨酸脱羧酶(ODC)是多胺生物合成的限速酶，它催化多胺生成的第 一步反应，帮鸟氨酸脱羧生成腐胺(PUT)。ODC的活性常作为再生组织和肿瘤发 生的指标，其活性的测定对研究细胞增殖及癌症的发病机理具有重要意义。 本文改进了丹磺酰氯柱前衍生HPLC法测定生物样品中多胺的方法，以l，7 庚二胺为内标，丹磺酰氯作荧光衍生剂，衍生产物经甲苯萃取后进行HPI。C分析。 采用TSKgel min，从4min到14 梯度洗脱(甲醇：水=80：20保持3 min，甲醇比率由80％梯 llln，柱温50℃，流 度增至100％)，激发波长九EX=340nln，发射波长九ElM=515 速0．8 0．9979，RSD分别为0。16％、0．19％、0．22％，最低检测限分别为0。17 pmol、0．23 pmol、0．19pmol。利用本法成功测定了2种发酵食品和癌症患者血液及组织中的 多胺含量，均取得了较为满意的结果。 本文还利用改进后的HPLC分析方法，评价了鸟氨酸脱羧酶(ODC)的活性。 比较了前列腺肿瘤患者和正常人血液中ODC的活性。结果表明，前列腺肿瘤患 者血液和组织中ODC活性约为正常入血液和组织中ODC活性的2-3倍。另外， 本实验对肿瘤患者血液中ODC反应的动力学行势进彳亍了研究，表明实验条件下， ODC酶促反应符合一般酶促反应动力学规律，同时测定了实验条件下的 Km：87．048 1／am01．L～，Vn溅一3．4532pmol·minq·L一。 关键词： 多胺鸟氨酸脱羧酶高效液相色谱荧光癌症 青岛科技大学研究生论文 onDeterminationof Content and Study Polyamines Ornithine withthe decarboxy(ODC)Activity lllCIH high[!rformecnamrolreD-ltglll)CLPH(cihpargotamorh．diuqil llqucnromatogra Fire；cence ue ecnecserechnlqoUeu Techniq ABSTRACT sma!l alkaline are molecules almost Polyamines aliphaticcompounds，which i