纯钛表面加载rgd多肽的体外实验分析-in vitro experimental analysis of rgd polypeptide loaded on pure titanium surface.docxVIP

安徽医科大学硕士学位论文安徽医科大学硕士学位论文万方数据万方数据学位论文独创性声明本人所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已 经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已 在论文中作了明确说明并表示谢意。学位论文作者签名： 日 期： 学位论文使用授权声明本人完全了解安徽医科大学有关保留、使用学位论文的规定。学校有权保留 学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版，有权将学 位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅，有权将学 位论文的内容编入有关数据库进行检索，有权将学位论文的标题和摘要汇编出 版。保密的学位论文在解密后适用本规定。学位论文作者签名： 导师签名：日期： 日期：目 录一、缩略词表………………………………………………1二、中文摘要………………………………………………2三、英文摘要………………………………………………4四、正文……………………………………………………81.引言……………………………………………………82.材料和方法……………………………………………103.结果……………………………………………………154.讨论……………………………………………………185.结论……………………………………………………286.参考文献………………………………………………28五、附录……………………………………………………33六、致谢……………………………………………………35七、综述……………………………………………………36英文缩略词表缩略词 AKP BMSCSDMSO FBS FESEM HA MTTAbbreviations英文全名alkaline phosphatasebone mesenchymal stem cells dimethyl sulphoxidefetal bovine serumfieldemission scanning electron microscopy hydroxyapatitemethy-thiazolyl-tetrazolium中文全名 碱性磷酸酶 骨髓基质干细胞 二甲基亚砜 胎牛血清 场发射扫描电镜 羟基磷灰石 四甲基偶氮噻唑盐OD optical dentisty 光密度PBS phosphatase buffer solution 磷酸盐缓冲液PEG polyethylene glycol 聚乙二醇Ti titanium 钛TiO2 titanium dioxide 二氧化钛XPS X-ray photoelectron spectroscopy X 射线光电子能谱1纯钛表面加载 RGD 多肽的体外实验研究摘要目的 钛种植体与骨界面之间形成的骨结合，是种植修复成功的关键。本研究拟 先在纯钛表面采用两步阳极氧化法形成双层蜂窝状TiO2纳米管，然后用聚多巴胺处 理纳米管表面，同时向外接枝偶联RGD多肽，构建TiO2纳米管-聚多巴胺-RGD多肽生 物活性层，体外评价该活性层对小鼠骨髓基质干细胞（BMSCs）的黏附、增殖和分 化的影响，以期为钛种植体表面生物改性提供新的思路。材料与方法 1，钛片预处理及制备TiO2纳米管：厚度0.25 mm的纯钛箔片加工成直 径为12 mm的钛片，金相砂纸（800目到7000目）逐级打磨抛光至镜面状，丙酮、 乙醇、去离子水中依次超声清洗20min，氮气流中吹干。继而将上述钛片放入盛有 88 mmol/L氟化铵的乙二醇电解液中，钛片作阳极，石墨作阴极，分两步阳极氧化： 第一步先在60 伏电压下通电2.5小时，取出钛片放入去离子水中，超声震荡去除 钛片表面阳极化形成的氧化膜；第二步改在12 伏电压下通电40分钟，取出钛片， 去离子水中超声清洗至溶液澄清，氮气流中吹干，备用。2，多巴胺修饰及加载RGD 多肽：电化学修饰后的钛片，浸泡于50ml、2mg/ml多巴胺溶液中12小时，避光， 保持周围气流通畅。取出修饰后的钛片，去离子水中反复冲洗去除表面未聚合残 余的多巴胺，室温下自然晾干。将上述钛片再浸泡于30ml、200?g/ml RGD多肽溶 液中，37℃恒温摇床上12小时，取出处理后的钛片，去离子水中反复冲洗去除表 面未结合牢固残余的多肽，室温下自然晾干。3，实验分组：打磨抛光的钛片作为 光滑组，阳极氧化处理的钛片作为TiO2纳米管组，在TiO2纳米管基础上多巴胺浸泡 修饰的钛片作为多巴胺组，通过多巴胺接枝偶联RGD多肽的钛片作为RGD多肽组。4， 表面形貌和元素组成检测：采用场发射扫描电镜（FESEM）、X射线光电子能谱（XPS） 对各组钛片进行表面形貌和元素组成分析。5，体外细胞学评价：体